公开(公告)号：KR100267744B1

公开(公告)日：2000-11-01

申请号：KR1019980000446

申请日：1998-01-10

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 탁동섭 ,  권준헌 ,  김병한 ,  송재영 ,  강신영 ,  안수환

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/33

Abstract: PURPOSE: Provided are a genetic recombinant baculovirus and a recombinant spike protein of transmissible gastroenteritis virus(TGEV) manufactured therefrom. And a monoclonal antibody capture enzyme linked immunosorbent assay for detecting the antibody of TGEV using the same protein is also provided, thereby the antibody of TGEV can be rapidly detected. CONSTITUTION: The recombinant spike protein of TGEV is produced by the steps of: isolating and identifying TGEV from pigs died of diarrhea; analyzing the nucleotide sequence of spike protein of TGEV; inserting the TGEV spike gene into the baculovirus gene to produce a recombinant baculovirus(KFCC-11015); infecting the recombinant baculovirus into SF9 cells to express TGEV spike protein. The antibody of TGEV is produced by inoculating the expressed recombinant TGEV spike protein into Guinea pigs. The monoclonal antibody capture enzyme linked immunosorbent assay using TGEV spike protein that is produced from the recombinant baculovirus(KFCC-11015) in Guinea pigs as an antigen is used in detecting the neutralizing antibody of TGEV.

Abstract translation: 目的：提供遗传重组杆状病毒和由其制备的传染性胃肠炎病毒（TGEV）的重组穗蛋白。 还提供了使用相同蛋白质检测TGEV抗体的单克隆抗体捕获酶联免疫吸附测定法，从而可以快速检测TGEV抗体。 构成：TGEV的重组穗蛋白是通过以下步骤制备的：从腹泻死亡的猪中分离和鉴定TGEV; 分析TGEV刺突蛋白的核苷酸序列; 将TGEV刺突基因插入杆状病毒基因以产生重组杆状病毒（KFCC-11015）; 将重组杆状病毒感染到SF9细胞中以表达TGEV穗蛋白。 通过将表达的重组TGEV穗蛋白接种到豚鼠中来产生TGEV抗体。 使用从作为抗原的豚鼠中的重组杆状病毒（KFCC-11015）产生的TGEV尖峰蛋白的单克隆抗体捕获酶联免疫吸附测定用于检测TGEV的中和抗体。

公开(公告)号：KR1019990065234A

公开(公告)日：1999-08-05

申请号：KR1019980000446

申请日：1998-01-10

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 탁동섭 ,  권준헌 ,  김병한 ,  송재영 ,  강신영 ,  안수환

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/33

Abstract: 돼지 전염성위장염바이러스(Transmissible gastroenteritis virus ; TGEV)의 구조 단백질 중 스파이크 단백질은 TGEV를 중화할 수 있는 중화항체 생산을 유도하는 단백질로 알려져 있다. 설사로 폐사한 돼지로부터 TGEV를 분리 동정한 후 스파이크 유전자의 염기서열을 분석하고 이 자료를 토대로 유전자재조합방법을 이용하여 곤충바이러스인 바큘로바이러스 유전자에 TGEV 스파이크 유전자를 삽입하여 재조합 TGEV 스파이크 단백질을 곤충세로(Sf9)에서 발현 시켰다. 발현된 재조합 TGEV 스파이크 단백질을 기니픽에 접종했을 때 TGEV에 대한 중화항체를 생산함을 혈청중화시험법을 이용하여 확인할 수 있었다. 따라서 재조합 TGEV 스파이크 단백질을 이용하여 TGEV에 대한 중화항체가를 TGEV 특이 단크론항체를 이용한 효소면역검사법(monoclonal antibody capture enzyme linked immunosorbent assay : MACELISA)으로 검출할 수 있다. 현재 TGEV에 대한 항체가를 측정하는 방법은 조직배양을 이용한 바이러스 중화시험법으로 까다로운 조직배양과 검사기간이 4-5일정도 소요되나 본 발명에서 사용된 MACELISA의 단계를 재조합단백질 반응 단계까지를 장치(kit)화 할 경우 TGEV에 재한 중화항체를 3시간 이내에 검사할 수 있다.