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11.发明公开
公开(公告)号：KR1020140129841A
公开(公告)日：2014-11-07
申请号：KR1020130048663
申请日：2013-04-30
Applicant: (주)차바이오텍 , 고려대학교 산학협력단
IPC: C12M1/16 , C12N5/0735 , C12Q1/00
CPC classification number: G01N33/5073 , C12M23/02 , C12M25/00 , C12N5/0068 , C12N2535/00
Abstract: 본 발명은 직경(Diameter) 또는 간격(Spacing)이 일정하게 변화하는 구배 나노기둥 어레이를 포함하는 세포배양용기에 세포를 배양하는 단계를 포함하는 배아줄기세포 배양에 적합한 표면구조를 스크리닝하는 방법, 상기 스크리닝 방법에 사용되는 일정하게 증가하는 직경을 갖는 나노기둥이 일정하게 감소하는 간격으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는 세포배양용기 및 상기 스크리닝 방법에 의해 선별된 조건의 나노기둥을 포함하는 세포배양용기에 세포를 배양하는 단계를 포함하는 지지세포 없이 줄기세포능(stemness)을 유지하면서 배아줄기세포를 배양하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일정하게 증가하는 직경(Diameter)을 갖는 나노기둥이 일정하게 감소하는 간격(Spacing)으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는 세포배양용기는 하나의 배양용기 내에서 다양한 표면 형태를 제공할 수 있으므로, 동일한 조건에서 수행되는 단일 배양에 의해 표면 형태의 변화가 세포특성에 미치는 영향을 동시에 모니터링할 수 있으며, 이를 이용하여 세포배양에 적합한 최적의 표면형태를 선별할 수 있다. 상기 스크리닝을 통해 선별된 인간 배아줄기세포를 배양하는 방법은 값비싼 세포외 기질을 코팅하거나 지지세포를 이용할 필요없이 줄기세포능을 유지하면서 증식시킬 수 있는 방법을 제공할 수 있다.Abstract translation: 本发明涉及一种筛选适合于培养胚胎干细胞的表面结构的方法，该方法包括在细胞培养容器中培养细胞的步骤，该细胞培养容器含有直径或间距均匀变化的梯度纳米柱阵列; 用于筛选方法的细胞培养容器，并且具有以规则减小的间隔均匀排列的具有规则增加的直径的纳米柱; 以及培养胚胎干细胞的方法，同时保持没有饲养细胞的茎干，其包括在含有通过筛选方法选择的纳米柱的细胞培养容器中培养细胞的步骤。 本发明的以规则减少的间隔均匀排列的具有规则增加的直径的纳米柱的细胞培养容器可以在单个培养容器中提供各种表面形态，因此可以同时监测单次培养中表面形态变化对细胞特征的影响 在相同条件下，从而选择适合于细胞培养的最佳表面形态。 培养通过筛选方法选择的人胚胎干细胞的方法可以实现胚胎干细胞的增殖，同时保持茎干，而不需要涂覆昂贵的细胞外底物或使用饲养细胞。
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公开(公告)号：KR1020140047343A
公开(公告)日：2014-04-22
申请号：KR1020120113492
申请日：2012-10-12
Applicant: (주)차바이오텍
Abstract: The present invention relates to culture conditions for effective isolation and proliferation of lung cancer cells from a lung cancer tissue of a patient, and a method for screening a patient-specific cancer therapeutic agent using the lung cancer cells cultured thereby, and more specifically, to a method for isolating and culturing lung cancer cells from a lung cancer tissue and a method for screening a patient-specific cancer therapeutic agent using the lung cancer cells prepared by the method. The method for isolating and culturing lung cancer cells from a lung cancer tissue, comprises the steps of: 1) cutting a lung cancer tissue isolated from a patient into a size of 40-60 μm in diameter; 2) allowing the cut tissue in step 1) to react with an enzyme to be separated into single cells; 3) proliferating the separated single cells in step 2) in a serum-free ACL4 medium or N2 added medium on a low-adhesion culture dish through suspension culture; and 4) subculturing the cells, which proliferate through the suspension culture in step 3), using Accutase, wherein step 4) does not require a separate Accutase reaction termination step. [Reference numerals] (A) Isolating cells from a cancer tissue according to the conventional art; (AA) Solid tumor; (B) Isolating and culturing lung cancer cells from a lung cancer tissue according to the present invention; (BB) Collagenase degradation; (CC) Single cell suspension; (DD) Cells in agar matrix; (EE) Incubation for 6-8 days; (FF) Cell population formation; (GG) Clonogenic cell isolation; (HH) Isolated clonogenic cell re-dispensing; (II) Cutting into a size of 40-100 um; (JJ) Suspension culture in an ultra-low adhesion (or pluronic F127 coating) culture dish; (KK) Effective cell Formation and culture in a serum-free medium; (LL) Suspension-cultured cell subculture using Accutase; (MM) Adherent culture; (NN) Suspension culture; (OO) EPCAM expression (%); (PP) Adherent culture; (QQ) Suspension culture; (RR) Culture and proliferation through suspension culture for suppressing an EMT phenomenon occurring due to adherent culture
Abstract translation: 本发明涉及用于从患者的肺癌组织中有效分离和增殖肺癌细胞的培养条件，以及使用由其培养的肺癌细胞筛选患者特异性癌症治疗剂的方法，更具体地，涉及 用于从肺癌组织分离和培养肺癌细胞的方法和使用通过该方法制备的肺癌细胞筛选患者特异性癌症治疗剂的方法。 从肺癌组织分离和培养肺癌细胞的方法包括以下步骤：1）将从患者分离的肺癌组织切成直径为40-60μm的大小; 2）允许步骤1）中的切割组织与待分离成单细胞的酶反应; 3）通过悬浮培养在低粘附培养皿中的无血清ACL4培养基或N 2添加培养基中的步骤2）中分离的单细胞增殖; 和4）使用Accutase，通过步骤3）中的悬浮培养物传代培养细胞，其中步骤4）不需要单独的Accutase反应终止步骤。 （附图标记）（A）根据现有技术从癌组织分离细胞; （AA）实体瘤; （B）根据本发明从肺癌组织中分离和培养肺癌细胞; （BB）胶原酶降解; （CC）单细胞悬液; （DD）琼脂中的细胞; （EE）孵育6-8天; （FF）细胞群体形成; （GG）克隆细胞分离; （HH）分离的克隆细胞重新分配; （二）切成40-100um的尺寸; （JJ）在超低粘附（或pluronic F127涂层）培养皿中的悬浮培养; （KK）有效细胞在无血清培养基中形成和培养; （LL）使用Accutase的悬浮培养细胞传代培养; （MM）贴壁培养; （NN）悬浮培养; （OO）EPCAM表达（％）; （PP）粘附培养; （QQ）暂停文化; （RR）通过悬浮培养培养和增殖以抑制由粘附培养引起的EMT现象
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13.发明授权
公开(公告)号：KR100986149B1
公开(公告)日：2010-10-07
申请号：KR1020070093418
申请日：2007-09-14
Applicant: (주)차바이오텍 , 차의과학대학교 산학협력단
CPC classification number: C12N5/0691 , C12N2500/02 , C12N2506/02
Abstract: 본 발명은 (a) 배아 줄기 세포로부터 유래된 배상체(embryoid body)를 함유하는 배양액을 상기 배양액 중의 용존 산소의 농도가 1 내지 5 ppm이 되도록 처리하는 단계; (b) 산소 분압이 15% 이하로 유지되는 배양기 중에 단계(a)에서 얻어진 상기 배양액을 배양하여 혈관 내피 전구 세포(vascular endothelial progenitor cells)로 분화시키는 단계; 및 (c) 단계(b)에서 얻어진 배양액으로부터 혈관 내피 세포를 분리하는 단계를 포함하는 배아 줄기 세포로부터 유래된 배상체로부터 혈관 내피 전구 세포를 분화시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 분화방법은 배아 줄기 세포로부터 유래된 배상체를 함유하는 배양액 자체를 저 산소 상태(예를 들어, 용존 산소의 농도가 1 내지 5 ppm)로 처리함으로써, 배상체 주위의 환경을 직접적인 저 산소 상태로 유도하여, 혈관 내피 전구 세포로의 분화 효율을 크게 향상시킬 수 있다. 또한, 단일 마커가 아닌 이중 마커 즉, CD133 및 KDR/Flk-1의 두 가지 표지 인자를 사용하여 상기 표지 인자에 모두 양성인 세포(즉, double positive population)를 유세포 분석기를 통해 분리할 경우, 혈관 내피 전구 세포를 순수하게 분리할 수 있다. 따라서, 본 발명의 분화방법은 혈관 내피 전구 세포를 높은 수율 및 순도로 분리할 수 있다.
배아 줄기 세포, 저 산소 상태, 혈관 내피 전구 세포-
公开(公告)号：KR100984376B1
公开(公告)日：2010-09-30
申请号：KR1020070092551
申请日：2007-09-12
Applicant: (주)차바이오텍 , 차의과학대학교 산학협력단
CPC classification number: A61K35/44 , A61K2035/128
Abstract: 본 발명은 배아 줄기 세포로부터 유래된 세포를 함유하는 세포치료용 세포 전달체(cell delivery system)로서, 상기 배아 줄기 세포로부터 유래된 세포를 마트리겔(matrigel)로 이루어진 담체의 내부에 삽입시켜 형성된 세포 전달체를 제공한다. 상기 세포 전달체는 질환 부위가 직접 접촉하지 않는 생체 내의 다른 부위에 이식되며; 상기 세포 전달체가 생체에 이식되었을 때, 상기 담체에 의하여 상기 이식 부위로부터의 상기 배아 줄기 세포로부터 유래된 세포의 생체 내 이동이 억제되고; 최종적으로 상기 이식 부위로부터 제거된다. 본 발명의 세포 전달체는 배아 줄기 세포로부터 유래된 세포가 질환 부위에 직접적으로 접근하지 않은 상태에서 상기 세포가 분비하는 사이토카인 등의 물질만으로 세포 치료 목적을 달성함으로써 배아 줄기 세포로부터 유래된 세포가 체내에 직접 이식되어 발생될 수 있는 암이나, 종양의 생성에 대한 문제를 배제할 수 있다.
세포 전달체, 배아 줄기 세포, 혈관 내피 세포-
15.发明公开
公开(公告)号：KR1020090129230A
公开(公告)日：2009-12-16
申请号：KR1020080055381
申请日：2008-06-12
Applicant: (주)차바이오텍
IPC: A61K35/545 , A61K9/00
CPC classification number: A61K35/44 , A61K35/545 , A61K9/0014
Abstract: PURPOSE: A method for wound healing using embryonic stem cell-derived vascular angiogenic progenitor cells is provided to improve wound healing efficiency and shorten healing period. CONSTITUTION: A method for wound healing using embryonic stem cell-derived vascular angiogenic progenitor cells comprises: a step of culturing embryonic stem cell-derived vascular angiogenic progenitor cells for transplantation; a step of transplanting the cultured embryonic stem cell-derived vascular angiogenic progenitor cells to mammal except for human; a step of differentiating embryonic stem cells to isolate blood vessel precursor cells; and a step of concentrating the cells through FACS.
Abstract translation: 目的：提供使用胚胎干细胞衍生的血管生成祖细胞进行伤口愈合的方法，以改善伤口愈合效率并缩短愈合期。 构成：使用胚胎干细胞衍生的血管生成祖细胞的伤口愈合方法包括：培养胚胎干细胞衍生的血管生成祖细胞用于移植的步骤; 将培养的胚胎干细胞衍生的血管生成祖细胞移植到除人之外的哺乳动物的步骤; 区分胚胎干细胞分离血管前体细胞的步骤; 以及通过FACS浓缩细胞的步骤。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：KR1020090040414A
公开(公告)日：2009-04-24
申请号：KR1020090028952
申请日：2009-04-03
Applicant: (주)차바이오텍 , 차의과학대학교 산학협력단
IPC: A61K47/00 , A61K35/545 , A61K49/00
CPC classification number: A61K47/00 , A61K35/545 , A61K49/0017
Abstract: A cell delivery system for cell therapy comprising embryonic stem cells-derived cells is provided to prevent cancer or tumor which can be generated by directly transplanting the embryonic stem cells-derived cells in the body and to treat diseases. A cell delivery system for treating vasculitis insufficiency-related diseases comprising blood vessel endothelial cell specialized from embryonic stem cells is formed by inserting the specialized blood vessel endothelial cell to the inside of a cell carrier made of matrigel. The cell carrier is transplanted to the other site within an organism which directly does not contact a disease part. When the cell carrier is transplanted to the organism, the in vivo migration of the blood vessel endothelial cell specialized from the transplanted site is supressed by a carrier and is finally removed from the transplanted site.
Abstract translation: 提供包含胚胎干细胞衍生细胞的细胞治疗的细胞递送系统，以预防可通过直接移植体内胚胎干细胞来源的细胞并治疗疾病而产生的癌症或肿瘤。 通过将专门的血管内皮细胞插入到由基质胶构成的细胞载体的内部，形成用于治疗包括由胚胎干细胞专门制备的血管内皮细胞的血管炎功能不全相关疾病的细胞递送系统。 将细胞载体移植到直接不接触疾病部位的生物体内的另一个部位。 当细胞载体移植到生物体时，由移植部位特异的血管内皮细胞的体内迁移被载体抑制，并最终从移植部位移除。
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17.发明公开저 산소 배양액 조건을 이용한 배아 줄기 세포로부터유래된 배상체로부터 혈관 내피 전구 세포의 분화방법 有权使用HYPOXIC MEDIA CONDITION从胚胎干细胞衍生的EMBRYOID体中分离血管内皮祖细胞的方法
公开(公告)号：KR1020090028104A
公开(公告)日：2009-03-18
申请号：KR1020070093418
申请日：2007-09-14
Applicant: (주)차바이오텍 , 차의과학대학교 산학협력단
CPC classification number: C12N5/0691 , C12N2500/02 , C12N2506/02
Abstract: A differentiation method of blood vessel endothelial progenitor cell from embryoid originating from embryonic stem cell is provided to induce environment of surrounding of embryoid to direct hypoxic state and to improve differentiation efficiency to the blood vessel endothelial progenitor cell. A differentiation method of blood vessel endothelial progenitor cell from embryoid originating from embryonic stem cell comprises steps of: processing a culture fluid containing embryoid originating from embryonic stem cell to dissolved oxygen of the culture fluid of 1~5 ppm; cultivating obtained culture fluid in a culture medium in which oxygen partial pressure is maintained under 15% and differentiating it to the blood vessel endothelial progenitor cell; and separating the blood vessel endothelial cell from the obtained culture fluid.
Abstract translation: 提供源自胚胎干细胞的胚胎的血管内皮祖细胞的分化方法，以诱导胚胎周围的环境以引导缺氧状态，并提高对血管内皮祖细胞的分化效率。 来自胚胎干细胞的胚胎的血管内皮祖细胞的分化方法包括以下步骤：将含有源自胚胎干细胞的胚状体的培养液加工成1〜5ppm培养液的溶解氧; 将培养液培养在氧分压保持在15％以下且与血管内皮祖细胞分化的培养基中， 并从所得培养液中分离血管内皮细胞。
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公开(公告)号：KR100744440B1
公开(公告)日：2007-08-01
申请号：KR1020060049183
申请日：2006-06-01
Applicant: (주) 차바이오텍 , 차의과학대학교 산학협력단
IPC: C12N5/071
Abstract: A process for isolating vascular endothelial cells from embryoid bodies differentiated from embryonic stem cells is provided to rapidly and efficiently recover the differentiated embryoid bodies by selectively removing portions having a small amount of the vascular endothelial cells, and minimize cell damage by using low concentration enzyme solution. The process for isolating vascular endothelial cells from an embryoid body differentiated from embryonic stem cells comprises the steps of: (a) treating the embryoid body differentiated from the embryonic stem cell with 0.005-0.015% of trypsin and 0.05-0.15 mM of ethylenediamine tetraacetate(EDTA) for 3-10 minutes; and (b) treating the vascular endothelial cells obtained from the step(a) with 0.1-0.5% of trypsin and 0.5-2 mM of EDTA for 3-10 minutes.
Abstract translation: 提供从胚胎干细胞分化的胚状体中分离血管内皮细胞的方法，通过选择性地除去具有少量血管内皮细胞的部分，通过使用低浓度酶溶液使细胞损伤最小化，从而快速有效地回收分化的胚状体 。 从胚胎干细胞分化的胚状体分离血管内皮细胞的方法包括以下步骤：（a）用0.005-0.015％的胰蛋白酶和0.05-0.15mM的乙二胺四乙酸盐处理胚胎干细胞分化的胚状体（ EDTA）处理3-10分钟; 和（b）用0.1-0.5％的胰蛋白酶和0.5-2mM的EDTA处理步骤（a）获得的血管内皮细胞3-10分钟。
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公开(公告)号：KR102249930B1
公开(公告)日：2021-05-10
申请号：KR1020180169929
申请日：2018-12-26
Applicant: (주)차바이오텍 , 포항공과대학교 산학협력단 , 건국대학교 글로컬산학협력단
IPC: C12N5/077
Abstract: 본발명은인간배아줄기세포에서중배엽세포로의분화유도방법및 분화유도용용기에관한것으로, 본발명의인간배아줄기세포에서중배엽세포로의분화유도방법은일정한간격으로형성된다수의나노포어를포함하는배양용기안에서인간배아줄기세포를배양하는단계를포함한다. 본발명의일 양태는인간배아줄기세포에서중배엽세포로분화시키는데 유용하게활용할수 있다.
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公开(公告)号：KR1020130043520A
公开(公告)日：2013-04-30
申请号：KR1020110107727
申请日：2011-10-20
Applicant: (주)차바이오텍 , 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: A method for isolating and proliferating lung cancer cells is provided to effectively isolate and proliferate the lung cancer cells from a patient with lung cancer, and to establish a lung cancer cell line. CONSTITUTION: A method for isolating and proliferating lung cancer cells from a lung cancer tissue comprises: a step of making an incision of a lung cancer tissue from a patient in a diameter of 40-100 micrometers; a step of culturing the lung cancer tissue; a step of isolating lung cancer cells using dispase; a step of culturing the lung cancer cells in a serum-free N2 medium; and a step of culturing the lung cancer cells in a medium containing serum and growth factors.
Abstract translation: 目的：提供肺癌细胞分离和增殖的方法，以有效地从肺癌患者中分离和增殖肺癌细胞，并建立肺癌细胞系。 构成：从肺癌组织分离和增殖肺癌细胞的方法包括：从直径为40-100微米的患者切下肺癌组织的步骤; 培养肺癌组织的一个步骤; 使用分泌酶分离肺癌细胞的步骤; 在无血清N2培养基中培养肺癌细胞的步骤; 以及在含有血清和生长因子的培养基中培养肺癌细胞的步骤。
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