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11.发明公开
公开(公告)号：KR1020080063592A
公开(公告)日：2008-07-07
申请号：KR1020070000177
申请日：2007-01-02
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: A recombinant microorganism is provided to secret a highly concentrated human epidermal growth factor in a pure state into a cell culture solution, thereby isolating and purifying the human epidermal growth factor very efficiently. A recombinant microorganism is co-transformed by a recombinant vector including a gene encoding an outer membrane protein F(OmpF) derived from E. coli and a recombinant vector including a gene encoding a human epidermal growth factor and secreting and expressing the human epidermal growth factor into a periplast of microorganism, thereby the gene encoding the OmpF and the gene encoding the human epidermal growth factor being expressed simultaneously and the human epidermal growth factor being extracellularly produced. A method for extracellular production of the human epidermal growth factor comprises the steps of: (a) culturing the recombinant microorganism to secret the human epidermal growth factor into a culture solution; and (b) collecting the human epidermal growth factor from the culture solution.
Abstract translation: 提供重组微生物以将纯的高度浓缩的人表皮生长因子分离成细胞培养液，从而非常有效地分离和纯化人表皮生长因子。 重组微生物通过包含编码来自大肠杆菌的外膜蛋白F（OmpF）的基因的重组载体和包含编码人表皮生长因子的基因的重组载体共转化，并分泌并表达人表皮生长因子 成为微生物的周质，从而编码OmpF的基因和编码人表皮生长因子的基因同时表达，并且人表皮生长因子被细胞外产生。 人表皮生长因子的细胞外产生方法包括以下步骤：（a）培养重组微生物以将人表皮生长因子分解成培养液; 和（b）从培养液中收集人表皮生长因子。
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公开(公告)号：KR1020050051148A
公开(公告)日：2005-06-01
申请号：KR1020030084888
申请日：2003-11-27
Applicant: 한국과학기술원
CPC classification number: B82Y30/00 , G01N33/544
Abstract: 본 발명은 자기조립(self-assembly)물질을 탄소나노튜브 상에 자기조립시키는 것을 특징으로 하는 자기조립물질로 랩핑(wrapping)된 수용성 탄소나노튜브의 제조방법 및 자기조립물질로 랩핑되어 있는 수용성 탄소나노튜브에 관한 것이다.
본 발명에 따른, 자기조립물질로 랩핑된 탄소나노튜브는 수용성 성질을 나타내므로 일반 탄소나노튜브와 비교하여 월등히 우수한 응용성을 가지게 된다. 특히, 상기 자기조립물질로 랩핑된 탄소나노튜브에 표적 바이오물질 혹은 유기화합물과 결합하는 리셉터를 선택적으로 부착하여 바이오센서를 제작하는 것이 가능하다.-
公开(公告)号：KR100718207B1
公开(公告)日：2007-05-15
申请号：KR1020050104830
申请日：2005-11-03
IPC: C12Q1/68
Abstract: 본 발명은 골드 결합 단백질(GBP)을 이용한 바이오-골드 칩 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 골드 결합 단백질(GBP)을 코딩하는 유전자와 목적단백질(또는 목적펩티드)을 함유하는 재조합벡터, 표면 발현모체를 코딩하는 유전자와 골드 결합 단백질(GBP)을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터, 표면 발현모체를 코딩하는 유전자와 골드 결합 단백질(GBP)을 코딩하는 유전자 및 목적단백질(또는 목적펩티드)을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터로 형질전환된 미생물을 배양하여 골드 결합 단백질(GBP)-목적단백질의 융합단백질, 표면발현모체에 의해 골드 결합 단백질(GBP) 또는 골드 결합 단백질(GBP)-목적단백질의 융합단백질이 표면발현된 세포를 제작한 다음, 이를 골드 칩에 위치특이적으로 고정하는 것을 특징으로 하는 바이오-골드 칩의 제작방법, 상기 방법으로 제작된 바이오-골드 칩 및 이를 이용한 바이오물질의 검출방법에 관한 것이다.
본 발명에 의하면, 골드 결합 단백질(GBP)을 이용하여 골드 칩 표면의 전처리 없이 직접 바이오물질을 고정함으로써, 복잡한 금속 칩 수식화 공정없이 바이오-골드 칩을 제작할 수 있어 생산성과 경제성에 향상된 효과를 기대할 수 있다.
골드 결합 단백질(GBP), 세포 표면 발현모체, 바이오-금속 칩-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：KR100677828B1
公开(公告)日：2007-02-02
申请号：KR1020050063957
申请日：2005-07-15
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 목적단백질을 세포 배양액으로 분비·생산하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 대장균 유래 세포외막에 단백질 F(OmpF) 유전자를 함유하는 재조합 발현벡터와 세포 배양액으로 분비하고자 하는 목적단백질을 함유하는 재조합 발현벡터로 동시에 형질전환된 미생물 및 상기 미생물을 배양하여 목적단백질을 세포배양액으로 분비·생산하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 목적단백질을 타 단백질과 융합없이 순수한 상태로 세포 배양액으로 분비시킬 수 있어 목적단백질의 효율적인 분리정제가 가능하다.
대장균, 세포외막 단백질 F (OmpF), 세포외 분비생산-
公开(公告)号：KR1020070009029A
公开(公告)日：2007-01-18
申请号：KR1020050063957
申请日：2005-07-15
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: A microorganism is provided to be able to simultaneously express Ompf and a target protein to secret and produce the target protein extracellularly. And a method for secreting and producing the target protein extracellularly by using the microorganism is provided. The recombinant microorganism is characterized in that it includes a recombinant vector including a gene for coding Ompf and a gene for coding a target protein, is simultaneously transformed to a recombinant vector capable of secreting and expressing the target protein into a periplasmic protein of a microorganism and has a characteristic capable of simultaneously expressing the gene for coding the Ompf and the gene for coding the target protein so as to secret and produce the target protein to a culture solution. The method for extracellularly secreting and producing a target protein comprises the steps of: (a) culturing the recombinant microorganism so as to secret the target protein to a culture solution; and (b) recovering the target protein from the culture solution.
Abstract translation: 提供微生物以能够同时表达Ompf和靶蛋白以保密并在细胞外产生靶蛋白。 并提供了通过使用微生物分泌并产生靶蛋白的方法。 重组微生物的特征在于其包含重组载体，其包含用于编码Ompf的基因和用于编码靶蛋白的基因的重组载体，同时转化为能够将靶蛋白分泌并表达为微生物的周质蛋白的重组载体， 具有能够同时表达用于编码Ompf的基因和用于编码靶蛋白的基因的特征，从而将培养液中的目标蛋白质分泌并产生。 细胞外分泌和产生靶蛋白的方法包括以下步骤：（a）培养重组微生物以将目标蛋白质分泌到培养液中; 和（b）从培养液中回收靶蛋白质。
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公开(公告)号：KR1020060052436A
公开(公告)日：2006-05-19
申请号：KR1020050104830
申请日：2005-11-03
IPC: C12Q1/68
Abstract: 본 발명은 금속 결합 단백질(MBP)을 이용한 바이오-금속 칩 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, MBP를 코딩하는 유전자와 목적단백질(또는 목적펩티드)을 함유하는 재조합벡터, 표면 발현모체를 코딩하는 유전자와 MBP를 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터, 표면 발현모체를 코딩하는 유전자와 MBP를 코딩하는 유전자 및 목적단백질(또는 목적펩티드)을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터로 형질전환된 미생물을 배양하여 MBP-목적단백질의 융합단백질, 표면발현모체에 의해 MBP 또는 MBP-목적단백질의 융합단백질이 표면발현된 세포를 제작한 다음, 이를 금속 칩에 위치특이적으로 고정하는 것을 특징으로 하는 바이오-금속 칩의 제작방법, 상기 방법으로 제작된 바이오-금속 칩 및 이를 이용한 바이오물질의 검출방법에 관한 것이다.
본 발명에 의하면, MBP를 이용하여 금속 칩 표면의 전처리 없이 직접 바이오물질을 고정함으로써, 복잡한 금속 칩 수식화 공정없이 바이오-금속 칩을 제작할 수 있어 생산성과 경제성에 향상된 효과를 기대할 수 있다.
금속 결합 단백질(MBP), 세포 표면 발현모체, 바이오-금속 칩-
公开(公告)号：KR100462832B1
公开(公告)日：2004-12-20
申请号：KR1020020019820
申请日：2002-04-11
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C12N15/11
Abstract: PURPOSE: A gene for cell-surface expression of foreign proteins or peptides is provided, thereby expressing the foreign proteins or peptides having normal function on the cell surface. CONSTITUTION: A gene for cell-surface expression of foreign proteins or peptides comprises the nucleotide sequence encoding the amino acid sequence from the N-terminal to 5th loop of outermembrane protein C(OmpC). A cell-surface expression vector of green fluorescent protein(GFP), pT7KSC-GFP comprises a gene for cell-surface expression encoding the amino acid sequence from the N-terminal to 7th loop of OmpC, T7 promoter, kanamycin resistant gene and GFP gene. A cell-surface expression vector of lipase, placKSC-lip comprises a gene for cell-surface expression encoding the amino acid sequence from the N-terminal to 7th loop of OmpC, lac promoter, kanamycin resistant gene and lipase gene. Transformed microorganisms, Escherichia coli BL21(DE3)/pT7KSC-GPF(KCTC-0897BP) and Escherichia coli MC4100/placKSC-lip are provided. The cell-surface expression proteins are obtained by culturing the transformed microorganisms and collecting proteins expressed on the cell surface.
Abstract translation: 目的：提供用于外源蛋白或肽的细胞表面表达的基因，由此在细胞表面表达具有正常功能的外源蛋白或肽。 构成：用于外源蛋白或肽的细胞表面表达的基因包含编码来自外膜蛋白C（OmpC）的N端至第5环的氨基酸序列的核苷酸序列。 绿色荧光蛋白（GFP）的细胞表面表达载体pT7KSC-GFP包含编码OmpC的N末端至第7个环的氨基酸序列的细胞表面表达用基因，T7启动子，卡那霉素抗性基因和GFP基因 。 脂肪酶的细胞表面表达载体placKSC-lip包含编码OmpC的N末端至第7个环的氨基酸序列的细胞表面表达基因，lac启动子，卡那霉素抗性基因和脂肪酶基因。 提供转化的微生物，大肠杆菌BL21（DE3）/ pT7KSC-GPF（KCTC-0897BP）和大肠杆菌MC4100 / placKSC-lip。 通过培养转化的微生物并收集细胞表面上表达的蛋白质获得细胞表面表达蛋白质。
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公开(公告)号：KR1020000042642A
公开(公告)日：2000-07-15
申请号：KR1019980058891
申请日：1998-12-26
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C12N15/70
CPC classification number: C12N15/70 , C07K14/195
Abstract: PURPOSE: Artificial secretory signal sequences and recombinant plasmids containing them are provided which can be used to secret foreign protein. CONSTITUTION: Signal sequences of secreted proteins from E. coli are compared and 23 conserved amino acid sequences are selected. 69 bp oligonucleotide and complementary oligonucleotide corresponding to the amino acid sequence are synthesized. pET3a, having inducible T7 promoter, is restricted with NdeI and BamHI. pJAS301 is constructed with joining of restricted large fragment of pET3a, synthesized signal sequences and endoxylanase gene. pTrc99A, having strong trc promoter, is restricted with NdeI and BamHI. pJAS101 is constructed with joining of restricted large fragment of pTrc99A, synthesized signal sequence and endoxylanase gene. PCR amplification is used to get lac promoter from pUC19 and amplified promoter is introduced into pET3a. The resulting plasmid pJHLacK is restricted with DraI and EcoRI and ligated with kanamycin resistance gene. pJAS402K is constructed with joining of signal sequence, alkaline phosphatase gene and kanamycin gene. PstI sites of pJSA101 and pJSA301 are removed to help cloning of foreign gene. Each plasmid is introduced into E. coli and induced with appropriate inducers. SDS-PAGE gel electrophoresis reveals that signal sequence works very well.
Abstract translation: 目的：提供人造分泌信号序列和含有它们的重组质粒，可用于保护外来蛋白。 构成：比较来自大肠杆菌的分泌蛋白的信号序列，并选择23个保守的氨基酸序列。 合成对应于氨基酸序列的69bp寡核苷酸和互补寡核苷酸。 具有诱导型T7启动子的pET3a被NdeI和BamHI限制。 pJAS301与pET3a的限制性大片段，合成信号序列和内切木聚糖酶基因连接构建。 具有强trc启动子的pTrc99A被NdeI和BamHI限制。 pJAS101构建与pTrc99A的限制性大片段，合成信号序列和内切木聚糖酶基因的连接。 PCR扩增用于从pUC19获得lac启动子，扩增的启动子被引入pET3a。 所得质粒pJHLacK受DraI和EcoRI的限制，并与卡那霉素抗性基因连接。 pJAS402K与信号序列，碱性磷酸酶基因和卡那霉素基因连接构建。 去除pJSA101和pJSA301的PstI位点以帮助克隆外源基因。 将每个质粒导入大肠杆菌并用合适的诱导物诱导。 SDS-PAGE凝胶电泳显示信号序列工作良好。
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