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公开(公告)号:CN104046702A
公开(公告)日:2014-09-17
申请号:CN201410272493.4
申请日:2014-06-17
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2531/119 , C12Q2563/131
Abstract: 本发明涉及一种噬菌体免疫环介导等温扩增检测法,首先将噬菌体展示多肽与分析物共同竞争捕获抗体的结合位点,然后环介导等温扩增结合在捕获抗体上的噬菌体,最后对免疫环介导等温扩增反应产物进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽,将免疫竞争和环介导等温扩增结合,实现对不含有核酸的小分子化合物的环介导等温扩增检测。本发明灵敏度高、实用性强,不需要昂贵的精密仪器。
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公开(公告)号:CN103601807A
公开(公告)日:2014-02-26
申请号:CN201310134272.6
申请日:2013-04-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/44 , C12N5/20 , C07C319/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及氨基甲酸肟脂类农药丁酮威单克隆抗体的制备方法,属于生物技术领域。专用于特异性识别氨基甲酸肟脂类农药丁酮威单克隆抗体的制备,及其在农产品和农业生产环境中丁酮威残留的高灵敏快速检测。丁酮威半抗原与载体蛋白通过活泼酯法偶联形成完全抗原,用该完全抗原免疫Balb/C鼠,脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,获得了稳定分泌抗丁酮威的单克隆抗体。本发明抗体的制备技术可行:抗原的整个制备过程不需要特别的仪器设备,易于规模化生产。
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公开(公告)号:CN103102415A
公开(公告)日:2013-05-15
申请号:CN201210238321.6
申请日:2012-07-11
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及同时识别吡虫啉和甲基对硫磷农药的双特异性单克隆抗体及其制备方法,属于生物技术领域。用杂交-杂交瘤技术将分泌抗甲基对硫磷单克隆抗体的杂交瘤细胞和经吡虫啉抗原免疫的小鼠脾细胞进行融合,获得了能稳定分泌同时抗甲基对硫磷和吡虫啉农药的双特异性单克隆抗体FQ-D6。此抗体经过有效性验证证明可用于农业生产环境和农产品中甲基对硫磷和吡虫啉残留的快速灵敏检测。本发明涉及的同时抗甲基对硫磷及吡虫啉农药双特异性单克隆抗体制备技术简便可行,抗体的整个制备过程无需特别的仪器设备,容易工厂化规模生产。
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公开(公告)号:CN103018435A
公开(公告)日:2013-04-03
申请号:CN201210237844.9
申请日:2012-07-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/531 , G01N33/558
Abstract: 本发明涉及甲基对硫磷等8种有机磷农药的多残留快速检测金标试纸条。试纸条含有衬板、样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫。金标结合垫为吸附金标抗体的玻璃纤维素膜;在纤维素膜上有甲基对硫磷偶联的载体蛋白溶液印制的直线式隐形检测线,用兔抗鼠IgG印制的直线式隐形对照线,两条线平行排列组合。本发明试纸条具有检测谱广、灵敏度高、快速、简便、直观、准确的特点,并且前处理简单,不需要任何仪器设备,无需专业人员操作。
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公开(公告)号:CN101880325A
公开(公告)日:2010-11-10
申请号:CN201010204933.4
申请日:2010-06-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/44 , C07K14/765 , C12N5/20 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及抗吡虫啉农药单克隆抗体及其制备方法,属于生物技术领域。用免疫半抗原1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺与牛血清白蛋白的偶联物免疫BALB/c鼠,将免疫后的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,获得了能稳定分泌抗吡虫啉农药单克隆抗体的杂交瘤株2F11/A9。此抗体经过有效性验证证明可用于农业生产环境和农产品中吡虫啉残留的灵敏快速检测。本发明涉及的抗吡虫啉农药单克隆抗体制备技术简便可行,抗体的整个制备过程无需要特别的仪器设备,容易工厂化规模生产。
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公开(公告)号:CN118388594A
公开(公告)日:2024-07-26
申请号:CN202410607380.9
申请日:2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , C07K16/44 , C12N15/11 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种高灵敏度的溴氰菊酯抗免疫复合物多肽,以及所述多肽在溴氰菊酯残留检测的非竞争性侧流免疫层析方法中的应用。本发明通过混合淘选噬菌体展示环七、八、九和十肽库,成功获得了17种溴氰菊酯抗免疫复合物多肽,均特异性结合溴氰菊酯单克隆抗体与溴氰菊酯形成的免疫复合物。序列为CYFDGAWYAC的多肽在非竞争性噬菌体酶联免疫吸附分析方法中的半饱和浓度为1.49ng/mL,灵敏度比基于包被原的竞争性酶联免疫吸附分析方法提高了209倍,且高于目前所报道的其他溴氰菊酯免疫检测方法。此外,本发明还涉及将固相合成的多肽应用于非竞争性侧流免疫层析试纸条,实现溴氰菊酯残留的快速检测。通过生物素‑链霉亲和素系统,C端生物素修饰的抗免疫复合物多肽与胶体金标记的链霉亲和素结合,制备了胶体金标记抗免疫复合物多肽探针,山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体和兔抗链霉亲和素多克隆抗体分别作为检测(T)线和控制(C)线,实现了溴氰菊酯正读数试纸条的制备。该试纸条在最佳缓冲液中对溴氰菊酯的可视检测限为6.25ng/mL,在小麦、大白菜和芹菜中为0.5μg/mL,且检测时间仅需8min。因此,本发明为溴氰菊酯检测提供了一种高灵敏度的多肽试剂,并建立了非竞争免疫层析方法实现了农产品中溴氰菊酯残留的快速、灵敏、低成本地检测,可作为一种可靠的溴氰菊酯初筛和现场检测工具。
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公开(公告)号:CN117903256A
公开(公告)日:2024-04-19
申请号:CN202311255443.0
申请日:2023-09-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/64 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种能够与二甲戊灵单克隆抗体特异性结合的噬菌体展示多肽,以及所述多肽在二甲戊灵免疫检测中的应用。本发明从噬菌体随机展示多肽库中淘选出了两种能够与二甲戊灵单克隆抗体特异性结合的噬菌体多肽。利用所得到的多肽和二甲戊灵单克隆抗体可建立竞争型酶连免疫吸附分析方法,经过优化,方法的半抑制浓度可达3.77ng/mL。该多肽可以通过固相合成技术被制备为无噬菌体载体的多肽,能够与二甲戊灵单克隆抗体建立免疫层析分析方法。该免疫层析分析方法的灵敏度相较于使用化学半抗原所建立的免疫层析分析方法提高两倍,最低检测浓度为5ng/mL。本发明为二甲戊灵免疫检测技术的开发提供了一种高灵敏度,实用可靠的竞争试剂。
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公开(公告)号:CN114276292B
公开(公告)日:2023-07-11
申请号:CN202111647665.8
申请日:2021-12-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D215/50 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二氯喹啉酸半抗原及其制备方法和应用。二氯喹啉酸半抗原采用从头化学合成,最大程度地保留了二氯喹啉酸的特征结构,且引入了合适的连接臂,尽可能地暴露出二氯喹啉酸的特征结构。将二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联,制备出了二氯喹啉酸人工抗原。利用该人工抗原获得了二氯喹啉酸单克隆抗体,该抗体灵敏度高,特异性强。经间接竞争酶联免疫吸附分析(ic‑ELISA)测定,二氯喹啉酸单克隆抗体的灵敏度(IC50)为1.63ng/mL,线性范围(IC10‑IC90)为0.28~10.38ng/mL,与二氯喹啉酸结构类似物农药均无交叉反应(CR<0.1%)。基于二氯喹啉酸单克隆抗体制备的胶体金试纸条灵敏度高、特异性强,其检测限为8ng/mL,可用于农产品和环境样品中二氯喹啉酸残留的快速检测。
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公开(公告)号:CN114276292A
公开(公告)日:2022-04-05
申请号:CN202111647665.8
申请日:2021-12-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D215/50 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了二氯喹啉酸半抗原及其制备方法和应用。二氯喹啉酸半抗原采用从头化学合成,最大程度地保留了二氯喹啉酸的特征结构,且引入了合适的连接臂,尽可能地暴露出二氯喹啉酸的特征结构。将二氯喹啉酸半抗原与载体蛋白偶联,制备出了二氯喹啉酸人工抗原。利用该人工抗原获得了二氯喹啉酸单克隆抗体,该抗体灵敏度高,特异性强。经间接竞争酶联免疫吸附分析(ic‑ELISA)测定,二氯喹啉酸单克隆抗体的灵敏度(IC50)为1.63ng/mL,线性范围(IC10‑IC90)为0.28~10.38ng/mL,与二氯喹啉酸结构类似物农药均无交叉反应(CR<0.1%)。基于二氯喹啉酸单克隆抗体制备的胶体金试纸条灵敏度高、特异性强,其检测限为8ng/mL,可用于农产品和环境样品中二氯喹啉酸残留的快速检测。
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公开(公告)号:CN114236113A
公开(公告)日:2022-03-25
申请号:CN202111575563.X
申请日:2021-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明涉及一种2,4‑滴的即用型免疫传感器,在获得2,4‑滴模拟表位多肽后,将多肽与纳米荧光素酶分裂后的大片段融合表达,将纳米荧光素酶分裂后的小片段与2,4‑滴纳米抗体融合表达,通过优化融合蛋白中的连接臂长度及多肽拷贝数,选择具有较好信噪比和响应值组合用于2,4‑滴的检测,融合蛋白中的多肽和纳米抗体的结合,使得LgN和SmN重建形成具有催化发光活性的纳米荧光素酶,从而显著增强体系的发光强度,而2,4‑滴会将多肽与纳米抗体的结合解离,使得体系的发光强度降低,本发明实现了对小分子的免标记、免固定、免洗涤的检测,具有快速、简便、经济、实用性强、灵敏度高的优势。
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