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公开(公告)号：CN118812638A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202410609602.0
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , C07K16/44 , C12N15/11 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种与氯氰菊酯免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在氯氰菊酯免疫检测中的应用。本发明利用氯氰菊酯单克隆抗体与氯氰菊酯形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出抗免疫复合物多肽。通过ELISA和一代测序，鉴定了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争ELISA的半饱和浓度为1.44ng/mL，优于目前所报道的氯氰菊酯免疫检测方法。本发明还涉及该多肽在氯氰菊酯免疫层析试纸条上的应用。通过固相化学合成得到的无噬菌体抗免疫复合物多肽和胶体金建立了非竞争免疫层析试纸条，其对氯氰菊酯的可视检测限为10ng/mL，优于已报道的氯氰菊酯免疫层析分析方法。同时，该试纸条检测农产品中的氯氰菊酯残留具有良好的准确性。
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公开(公告)号：CN118459552A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410607446.4
申请日：2024-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种与高效氟吡甲禾灵免疫复合物特异性结合的多肽，以及所述多肽在高效氟吡甲禾灵免疫检测中的应用。本发明利用高效氟吡甲禾灵单克隆抗体与高效氟吡甲禾灵形成的免疫复合物，从噬菌体展示随机多肽库中淘选出特异性结合的多肽，通过ELISA和一代测序，获得了阳性克隆及其多肽序列。基于最佳的多肽所建立非竞争噬菌体ELISA的半饱和浓度为1.83ng/mL，高于目前所报道的高效氟吡甲禾灵免疫检测方法。可用于快速、灵敏、低成本、高特异性地检测环境和农产品中高效氟吡甲禾灵残留。
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公开(公告)号：CN113698394B
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202111125286.2
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D405/06 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种丙环唑半抗原及其制备方法和应用。丙环唑半抗原采用从头合成法，在丙环唑的苯环上连接含有4个C原子的连接臂，并在连接臂末端引入可以和载体蛋白偶联的羧基基团。利用该半抗原制备的单克隆抗体灵敏度高，特异性强。用间接竞争酶联免疫测定(ic‑ELISA)的方法测得其灵敏度(IC50)为2.33μg/L，检测范围(IC10‑IC90)为0.26‑21.28μg/L。该单克隆抗体与丙环唑类似物均无交叉反应(CR＜0.1％)。此外，利用该单克隆抗体制备了检测灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低的丙环唑胶体金快速检测试纸条。该试纸条可用于检测农产品中丙环唑的残留，其检测限达5μg/L。
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公开(公告)号：CN114236113B
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202111575563.X
申请日：2021-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明涉及一种2，4‑滴的即用型免疫传感器，在获得2，4‑滴模拟表位多肽后，将多肽与纳米荧光素酶分裂后的大片段融合表达，将纳米荧光素酶分裂后的小片段与2，4‑滴纳米抗体融合表达，通过优化融合蛋白中的连接臂长度及多肽拷贝数，选择具有较好信噪比和响应值组合用于2，4‑滴的检测，融合蛋白中的多肽和纳米抗体的结合，使得LgN和SmN重建形成具有催化发光活性的纳米荧光素酶，从而显著增强体系的发光强度，而2，4‑滴会将多肽与纳米抗体的结合解离，使得体系的发光强度降低，本发明实现了对小分子的免标记、免固定、免洗涤的检测，具有快速、简便、经济、实用性强、灵敏度高的优势。
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公开(公告)号：CN113563292A
公开(公告)日：2021-10-29
申请号：CN202110682788.9
申请日：2021-06-18
Applicant: 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) , 南京农业大学
IPC: C07D311/16 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K16/44 , G01N33/53
Abstract: 本发明适用于质量检测技术领域，提供了一种莨菪亭半抗原、人工抗原及其制备方法、抗体、应用；其中，所述莨菪亭半抗原的结构式如下所示：所述n为2‑4中的任一整数。本发明通过在莨菪亭的羟基基团上直接引入羧基基团，最大限度的保留莨菪亭的化学结构和特征，并可直接与载体蛋白偶联，为后续制备强特异性和高灵敏度抗体奠定了基础；并且，以此莨菪亭半抗原为基础制备莨菪亭人工抗原，由该莨菪亭人工抗原得到的抗体具有较高的效价、特异性和亲和力，能应用于烟叶等农产品及相关食品中莨菪亭快速、特异性检测。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110627872A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910965913.X
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与吡虫啉抗体特异性结合的多肽，以及该多肽在检测吡虫啉中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的吡虫啉抗体对噬菌体展示随机线十二肽库进行3轮淘选，淘选出与吡虫啉抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在吡虫啉检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中吡虫啉残留。
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公开(公告)号：CN113861270A
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN202111125290.9
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K7/06 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/53
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与噻虫胺抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在噻虫胺检测中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用噻虫胺抗体对噬菌体展示随机八肽、九肽库进行淘选，筛选与噻虫胺抗体特异性结合的噬菌体展示多肽；三轮淘选后，随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增，通过噬菌体ELISA方法验证阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序，获得多肽的氨基酸序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在噻虫胺检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的竞争噬菌体酶联免疫分析方法可用于灵敏、准确、便捷、低成本的检测环境和农产品中噻虫胺残留。
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公开(公告)号：CN104987361B
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201510418522.8
申请日：2015-07-15
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及具有与苯噻菌酯抗体特异性结合的多肽，包括所述多肽在检测苯噻菌酯中的应用。本发明采用噬菌体展示技术，用蛋白A柱纯化的苯噻菌酯抗体对噬菌体展示随机环八肽库进行3轮淘选，淘选出与苯噻菌酯抗体结合的噬菌体克隆；随机挑取若干噬菌体克隆进行扩增和质粒提取，通过噬菌体ELISA方法选择阳性噬菌体克隆，并将阳性克隆进行测序获得多肽序列。本发明还涉及该噬菌体展示多肽在苯噻菌酯检测中的应用。用该噬菌体展示多肽建立的噬菌体酶联免疫分析方法可用于快速、灵敏、简便和廉价检测环境和农产品中苯噻菌酯残留。
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公开(公告)号：CN110567929A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910965914.4
申请日：2019-10-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64 , G01N33/558 , G01N33/68 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种氯噻啉的双信号侧流免疫层析检测方法，首先重组示踪物与分析物共同竞争偶联在胶体金上的分析物抗体的结合位点，随后重组示踪物被抗His-tag抗体捕获，对于色度信号，可直接再自然光源下用相机拍照，对于荧光信号，将试纸条放置于多功能成像仪中拍照，随后对图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与增强型绿色荧光蛋白的重组蛋白为荧光供体，以抗氯噻啉抗体偶联的胶体金颗粒为荧光受体，根据荧光内滤效应，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以对小分子的定量、在线检测。
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公开(公告)号：CN104327186B
公开(公告)日：2017-02-01
申请号：CN201410359926.X
申请日：2014-07-25
IPC: C07K16/44 , C12N5/20 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种抗联苯菊酯单克隆抗体及其用途，尤其是一种可特异性识别联苯菊酯的单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，以及所述单克隆抗体的用途，属于生物学领域。将其人工抗原免疫BALB/c雌性小鼠，将骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾脏细胞进行细胞融合，制备得到杂交瘤细胞；通过系列筛选和亚克隆得到能稳定分泌抗联苯菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；再将该杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水；采用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水，得到所述的单克隆抗体。制得联苯菊酯的特异性单克隆抗体。这种抗体与其他化合物不发生交叉反应。用该抗体建立的酶联免疫层析分析方法可用于快速、灵敏、方便和廉价检测环境和农产品中联苯菊酯残留。
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