Abstract:
PURPOSE: A recombinant vector containing chimeric beta-agarase and a transformant thereof are provided to be used in SSF(simultaneous saccharification and fermentation) or consolidated bioprocessing. CONSTITUTION: A recombinant vector contains a chimeric beta-agarase gene containing a gene of a dockerin module of a beta-agarase gene. The beta-agarase gene is derived from Zobellia galactanivorans. The beta-agarase gene has a base of sequence number 1. The dockerin module gene has a base of sequence number 2. A transformant E. coli DH5laph(cAgaB, deposit number KCCM11164P) is transformed by a recombinant vector. The recombinant vector contains a mini-cellulose-binding protein A gene. The cellulose binding module has a base of sequence number 3. Two cohesin modules have a base of sequence number 4 or 5.
sp . )으로부터 유래한 엔도글루칸아제 활성부위 유전자에 클로스트리디움 속 균주의 도커린 모듈을 연결한 키메라 유전자와 클로스트리디움 속 ( Clostridium
sp . )으로부터 유래한 셀룰로즈-결합 단백질-에이의 일부분인 mCbpA 유전자가 삽입된 재조합 벡터, 상기 벡터로 형질전환되어 단백질이 효모에서 세포외로 분비되어 재조합체 소형 셀룰로좀(Designer recomninant mini-cellulosome)을 형성하도록 만든 효모 형질전환체 및 상기 형질전환체를 이용한 에탄올 생산에 관한 것이다. 본 발명의 클로스트리디움 속 미생물로부터 유래한 엔도-베타-1,4-글루칸아제-비의 도커린 모듈을 클로스트리디움 속 미생물로부터 유래한 엔도-베타-1,4-글루칸아제-이의 활성 부위에 연결한 키메라 단백질이 본 발명의 클로스트리디움 속 미생물로부터 유래한 소형 셀룰로즈-결합 단백질-에이(Mini-Cellulose-binding protein A)간의 상호작용에 의해 결합한 거대 복합체인 재조합체 소형 셀룰로좀(Designer recomninant mini-cellulosome)은 결정형 셀룰로오스(crystalline cellulose)의 분해 효율을 높이는 능력이 있어 이 유전자를 바이오에탄올 생산능이 있는 효모에 형질전환 시키면 셀룰로오스 자체를 분해하는 효율을 높일 수 있다. 또 본 발명의 클로스트리디움 속 미생물로부터 유래한 소형 셀룰로즈-결합 단백질-에이(Mini-Cellulose-binding protein A)의 셀룰로스-결합 모듈 (Cellulse binding module; CBM)과 셀룰로즈와의 상호작용을 이용함으로써 단백질을 효과적으로 분리할 수 있게 한다. 또한, 본 발명에 따라 클로스트리 디움 속 미생물로부터 유래한 엔도-베타-1,4-글루칸아제-이의 키메라 유전자와 소형 셀룰로즈-결합 단백질-에이(Mini-Cellulose-binding protein A)와 사카로마이콥시스 속 미생물로부터 유래한 베타-글루코시다아제 유전자가 도입된 효모 형질전환체는 에탄올 발효 공정에 유용하게 사용될 수 있다. CMC(carboxymethylcellulose)를 기질로 한 발효결과 상기 유전자들이 도입된 효모 형질전환체가 소형 셀룰로즈-결합 단백질-에이(Mini-Cellulose-binding protein A)가 도입되지 않은 효모균주보다 많은 양의 에탄올을 생성하였다. 키메라 유전자, 클로스트리디움 속 (Clostridium sp.)으로부터 유래한 셀룰로즈-결합 단백질-에이, 재조합 벡터, 재조합체 소형 셀룰로좀