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    구제역 바이러스 검출용 핵산 칩과 그 탐침의 서열
    52.
    发明公开
    구제역 바이러스 검출용 핵산 칩과 그 탐침의 서열 有权
    用于检测和分型口蹄疫病毒的核酸芯片及其探针序列

    公开(公告)号：KR1020150041875A

    公开(公告)日：2015-04-20

    申请号：KR1020130120382

    申请日：2013-10-10

    Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

    Inventor： 이광녕 ,  홍장관 ,  김수미 ,  박종현 ,  고영준 ,  이향심 ,  조인수

    IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/68

    CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6837 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2525/107

    Abstract: 본발명은구제역바이러스검출용핵산칩과그 탐침의서열에관한것으로, 구체적으로혈청형별각 구제역바이러스에특이적인 16종의탐침이포함되어혈청형별구제역바이러스유래핵산과특이적으로교잡함으로써시료내의구제역바이러스의유무및 구제역바이러스의혈청형을구분할수 있는구제역바이러스검출용인공핵산칩에관한것이다. 본발명에따르면, 시료로부터구제역바이러스를매우손쉽고빠르게타입별로검출할수 있으며, 타입이다른여러종의구제역바이러스가동시에존재하더라도정확하게검출할수 있다. 이는기존염기서열분석방법에비해소요되는시간과인력, 비용을상당히줄일수 있는방법이며, 여러종류의바이러스도동시에검출할수 있으므로매우개선된방법이라할 수있다. 또한, 새롭게변이된바이러스가나타날경우, 이에대한탐침을별도로제착하여본 발명의핵산칩에추가하는방법으로손쉽게업데이트할수 있다는장점도있다. 본발명의구제역바이러스검출용핵산칩, 이핵산칩을사용하여구제역바이러스를검출하는방법및 구제역바이러스검출용키트는특히우리나라나주변국가에서발생하는구제역에빠르게대처하는데큰 도움이될 것이라고판단된다.

    Abstract translation: 本发明涉及用于检测口蹄疫病毒的核酸芯片及其探针序列，更具体地，涉及用于检测口蹄疫病毒的人造核酸芯片，其包括16种类型的足部特异性探针 根据每种血清类型的口蹄疫，并根据每种血清类型与来源于口蹄疫的特异性核酸混合，从而辨别口蹄疫病毒的血清， 口腔病毒存在或不存在于样品中。 在本发明中，提供了一种用于检测口蹄疫病毒的方法，其用于从样品中容易地检测来自所述样品的ti类型的口蹄疫病毒，并用于准确地检测所述脚 - 即使存在各种类型的口蹄疫病毒，口蹄疫病毒研究人员也希望，与现有方法相比，大大减少了分析碱基序列的时间，研究人员和成本，同时检测各种病毒，被认为是改进的 另外制造用于新型变体病毒的新型变体病毒的新探针并相应地附着于核酸芯片的方法，从而使核酸芯片容易升级。 在本发明中，提供了用于检测口蹄疫病毒的核酸芯片，用于检测口蹄疫病毒的方法和用于检测口蹄疫病毒的试剂盒，其可以用于 处理韩国及邻近国家口蹄疫的爆发。

    Ｃ형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질 항원과 단클론항체를 이용한 Ｃ형 구제역 진단방법
    58.
    发明授权
    Ｃ형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질 항원과 단클론항체를 이용한 Ｃ형 구제역 진단방법 有权
    口蹄疫病毒C型基因工程蛋白和单克隆抗体及其应用于诊断方法

    公开(公告)号：KR101412038B1

    公开(公告)日：2014-07-01

    申请号：KR1020120082501

    申请日：2012-07-27

    Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

    Inventor： 고영준 ,  이향심 ,  박종현 ,  이광녕 ,  김수미 ,  조인수

    IPC: C12N7/01 ,  G01N33/569 ,  C12N15/33 ,  C07K16/08

    Abstract: 본 발명은 C형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질 항원과 단클론항체를 이용한 C형 구제역 진단방법에 관한 것이다.
    본 발명의 C형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질 항원과 단클론항체를 이용한 C형 구제역 진단방법의 일예로서 하기 (1)단계 내지 (11)단계로부터 실시될 수 있다.
    (1) 플레이트에 C형 구제역 바이러스 항체를 반응시키는 단계;
    (2) 상기 플레이트에 부착되지 않은 항체를 세척하여 제거하는 단계;
    (3) 상기 플레이트에 진단항원으로 C형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질을 반응시키는 단계;
    (4) 상기 플레이트에 부착되지 않은 C형 구제역 바이러스 유전자재조합 단백질을 세척하여 제거하는 단계;
    (5) 상기 플레이트에 검사혈청시료를 반응시키는 단계;
    (6) 상기 플레이트에 부착되지 않은 검사혈청시료를 세척하여 제거하는 단계;
    (7) 상기 플레이트에 C형 구제역 바이러스 단클론항체를 넣어 반응시키는 단계;
    (8) 상기 플레이트에 부착되지 않은 C형 구제역 바이러스 단클론항체를 제거하는 단계;
    (9) 상기 플레이트에 호스레디쉬 페록시다제 효소가 결합된 항마우스 항체를 반응시키는 단계;
    (10) 상기 플레이트에 부착되지 않은 호스레디쉬 페록시다제 효소가 결합된 항마우스 항체를 세척하여 제거하는 단계;
    (11) 효소반응에 의한 발색반응의 흡광도를 측정하여 검사혈청시료 중의 C형 구제역 바이러스 항체 수준을 측정하는 단계.

    감염력이 있는 구제역바이러스 Ｏ형 ｃＤＮＡ 클론 및 클론의 전체염기서열
    59.
    发明授权
    감염력이 있는 구제역바이러스 Ｏ형 ｃＤＮＡ 클론 및 클론의 전체염기서열 有权
    O型口蹄疫病毒的传染性cDNA克隆和克隆的完整序列

    公开(公告)号：KR101384513B1

    公开(公告)日：2014-04-14

    申请号：KR1020110147110

    申请日：2011-12-30

    Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

    Inventor： 이광녕 ,  김수미 ,  박종현 ,  고영준 ,  이향심 ,  조인수 ,  이서용

    IPC: C12N15/33 ,  C12N15/86

    Abstract: 본 발명은 구제역의 7가지 혈청형(O, A, Asia 1, C, SAT 1, SAT 2, SAT 3)중에서, O형 PanAsia 계통에 속하는 2002년 국내 발생한 구제역바이러스(O/SKR/2002)의 전체 RNA 게놈을 double strand DNA형태로 증폭하여 벡터에 삽입한 클론들과 그 서열에 관한 것으로서, 이들 클론은 linear DNA형태로 혹은 in vitro transcribed RNA 형태로 특정 세포에 형질도입(Transfection)시켰을 경우에 감염력이 있는 구제역바이러스를 생성하거나 구제역바이러스 단백질을 생산할 수 있도록 최종 선발된 것들이다.
    본 발명은 구제역 병원성 확인 연구나 백신 및 진단법 개발의 효과적인 연구 수단으로 폭 넓게 활용될 수 있는 구제역바이러스 cDNA 클론을 작성한 것으로, 클론 작성의 대상이 되는 구제역바이러스는 2002년 국내 양돈농가에서 사육중이던 돼지에서 발생되어 보고된 구제역바이러스 국내분리주 및 임상시료내 바이러스이다. 이 바이러스는 1990년대 초반부터 아시아에서 발생하기 시작하여 현재까지 전 세계적으로 가장 널리 전파된 혈청형 O형의 PanAsia 계통으로 분류되고 있으며, 본 발명에서 이 계통의 바이러스로는 최초로 감염력이 있는 cDNA 형태로 클로닝되었다.
    먼저 감염력있는 클론 작성을 위해 돼지유래세포(IB-RS-2)에서 3회 이상 계대증식된 바이러스의 게놈 RNA를 추출하여 cDNA를 합성한 뒤, 전체 게놈을 네 부위로 나누어 증폭시키고 그 각각을 별개의 벡터에 클로닝 하였다. 이렇게 작성된 클론들을 하나의 벡터로 클로닝하여 연결한 뒤, 클로닝 과정에서 임의로 생성된 비의도적 돌연변이를 site-directed mutagenesis를 통하여 원래의 서열과 동일하도록 교정해 주었다. 한편, 분리주 유래의 cDNA 클론에 돼지 및 소 임상시료내 바이러스(야외주) 염기서열을 반영하기 위한 게놈부위(genomic region) 치환 작업을 광범위하게 실시하였다. 이러한 클론들의 세포실험 또는 동물실험을 통해서 우리는 구제역 cDNA클론의 감염성 획득여부에 결정적인 역할을 하는 두 게놈 부위 (poly(C) 및 VP1)를 확인하였고, 이 두 부위에 대한 적절한 유전적 조작(mutagenesis)를 통해서 감염력이 있는 cDNA클론을 최종적으로 선발할 수 있었다. 아울러 감염력은 확인되지 않으나 복제능이 있고 구제역바이러스 단백질을 생산하는 비감염성 cDNA클론도 선발하였다.
    특히, VP1 단백질을 번역하는 게놈부위 특정 위치(Residue)의 아미노산서열이 페닐알라닌(Phenylalanine)이 아닌 cDNA클론의 경우, 이 클론은 DNA 혹은 RNA 형태로 세포에 형질도입(Transfection)된 후의 바이러스 생성과정에서 해당 위치의 아미노산서열이 페닐알라닌(Phenylalanine)으로 선택(Selection)되어 치환(Substitution)되는 현상이 지속적으로 확인되었다. 이러한 특정위치의 염기서열(아미노산서열)의 변화는 바이러스가 획득될 때 나타내는 세포변성효과(Cytopathic effect, CPE) 등과 더불어 바이러스 획득여부를 판가름할 수 있는 중요한 지표로 활용될 수 있으며, 바이러스의 침입, 감염 및 진화연구와 바이러스억제제 개발의 소재로도 활용될 수 있다.

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