公开(公告)号：CN107217069B

公开(公告)日：2020-06-26

申请号：CN201710398868.5

申请日：2017-05-31

Applicant: 何伟

Inventor： 徐晓辉 ,  王莉洁 ,  孙丹 ,  何伟

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/12 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种高效表达重组牛成纤维细胞生长因子‑2(rbFGF‑2)的方法。本发明首先根据大肠杆菌密码子使用偏好性，对FGF2基因序列的密码子进行替换，设计合成了rbFGF‑2核苷酸序列全长，构建得到能够表达rbFGF‑2蛋白的表达载体，将该表达载体与分子伴侣质粒先后导入到同一大肠杆菌中进行共表达。本发明解决了原核生物与真核生物在密码子使用偏好上存在差异，导致外源基因在大肠杆菌体内不能高效表达的问题；同时，通过与分子伴侣共表达，增进目标蛋白质稳定性，显著提高了rbFGF‑2蛋白的产量和活性。

公开(公告)号：CN105755087B

公开(公告)日：2019-05-28

申请号：CN201610164972.3

申请日：2016-03-22

Applicant: 何伟 ,  徐晓辉

Inventor： 徐晓辉 ,  王莉洁 ,  孙丹 ,  何伟

IPC: C12N5/04

Abstract: 万寿菊细胞培养生产游离叶黄素的方法，涉及植物细胞培养技术。按照下述步骤进行：(1)外植体诱导产生愈伤组织细胞；(2)经筛选建立万寿菊愈伤组织细胞系；(3)高产游离叶黄素的悬浮细胞培养系的建立；(4)悬浮细胞扩大培养用于游离叶黄素的生产；(5)细胞中游离叶黄素的提取和产率测定。本发明为一种生产叶黄素的新方法，能够连续生产，不受季节和外界环境的限制，可为临床药用提供新的来源；所获得的细胞产物直接为游离叶黄素，而非叶黄素酯，省去下游皂化反应步骤；细胞产物成分简单，杂质少，易于下游叶黄素的分离、纯化。

公开(公告)号：CN105755087A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201610164972.3

申请日：2016-03-22

Applicant: 何伟 ,  徐晓辉

Inventor： 徐晓辉 ,  王莉洁 ,  孙丹 ,  何伟

IPC: C12P23/00 ,  C12N5/04

CPC classification number: C12P23/00 ,  C12N5/04 ,  C12N2500/30 ,  C12N2500/34 ,  C12N2500/40 ,  C12N2529/10

Abstract: 万寿菊细胞培养生产游离叶黄素的方法，涉及植物细胞培养技术。按照下述步骤进行：(1)外植体诱导产生愈伤组织细胞；(2)经筛选建立万寿菊愈伤组织细胞系；(3)高产游离叶黄素的悬浮细胞培养系的建立；(4)悬浮细胞扩大培养用于游离叶黄素的生产；(5)细胞中游离叶黄素的提取和产率测定。本发明为一种生产叶黄素的新方法，能够连续生产，不受季节和外界环境的限制，可为临床药用提供新的来源；所获得的细胞产物直接为游离叶黄素，而非叶黄素酯，省去下游皂化反应步骤；细胞产物成分简单，杂质少，易于下游叶黄素的分离、纯化。

公开(公告)号：CN107217069A

公开(公告)日：2017-09-29

申请号：CN201710398868.5

申请日：2017-05-31

Applicant: 何伟

Inventor： 徐晓辉 ,  王莉洁 ,  孙丹 ,  何伟

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/12 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种高效表达重组牛成纤维细胞生长因子‑2(rbFGF‑2)的方法。本发明首先根据大肠杆菌密码子使用偏好性，对FGF2基因序列的密码子进行替换，设计合成了rbFGF‑2核苷酸序列全长，构建得到能够表达rbFGF‑2蛋白的表达载体，将该表达载体与分子伴侣质粒先后导入到同一大肠杆菌中进行共表达。本发明解决了原核生物与真核生物在密码子使用偏好上存在差异，导致外源基因在大肠杆菌体内不能高效表达的问题；同时，通过与分子伴侣共表达，增进目标蛋白质稳定性，显著提高了rbFGF‑2蛋白的产量和活性。