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公开(公告)号：CN114292946A
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202111681103.5
申请日：2021-12-30
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11 , A01H1/02
Abstract: 本发明公开了一种拟南芥csn5a/csn5b双突变体的培育鉴定方法，属于分子育种和生物技术领域。包括以下步骤：1)获取拟南芥csn5a、csn5b单突变体种子；2)种子消毒并接种于1/2MS培养基培养至萌发；3)采集拟南芥叶片提取DNA，利用LP和RP，LBb1.3和RP组合的双引物法，进行PCR扩增，鉴定csn5a纯合突变体、csn5b纯合突变体；4)收集种子，重复步骤2)和3)，扩繁后获得稳定的纯合突变体M2代，进行正反向遗传杂交；5)收集F1代种子，重复步骤2)和3)，鉴定csn5a/csn5b双突变体。本申请操作简单，重复性好，效率高，成本低。
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公开(公告)号：CN117417933A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202311358596.8
申请日：2023-10-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/02 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了美洲黑杨花药特异表达启动子ProRR08及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明的美洲黑杨花药特异表达启动子ProRR08，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次在美洲黑杨中克隆获得了促进花药特异性表达的启动子ProRR08，在此基础上构建植物表达载体pKGWFS7.1‑ProRR08::GUS，转入烟草中，得到转基因烟草植株。检测结果表明，35S::GUS对照在所有组织中均表达，而ProRR08启动子驱动GUS在花药中高表达，在其他组织中均不表达，结论表明美洲黑杨启动子ProRR08驱动GUS基因在花药中特异性表达。
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公开(公告)号：CN115491383B
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202211186282.X
申请日：2022-09-27
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种“南林895杨”外源基因高效瞬时转化体系的建立方法，属于生物技术领域。本发明针对“南林895”组培苗叶片特性建立了最适配比的酶解溶液和最佳酶解时间，以及通过对叶片进行暗培养、调整孵化温度时间、转化温度、转化使用的混匀仪器等条件，获得了大量原生质体和提高了转化效率，大大缩短了工作时间，并且重复性极好。本发明提供的“南林895”外源基因瞬时转化体系的建立方法，为原生质体瞬时转化及基因表达特性的研究提供了一种有效途径，为研究亚细胞定位、蛋白质‑蛋白质相互作用、染色质免疫沉淀、蛋白质印迹、单细胞测序和基因组编辑等领域技术提供前提，也为其它非模式植物外源基因瞬时转化体系的建立提供参考。
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公开(公告)号：CN111100868A
公开(公告)日：2020-05-05
申请号：CN201911307086.1
申请日：2019-12-17
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/02 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了一种美洲黑杨的促雌基因FERR和抑雌基因FERR-R及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过家系连锁分析对美洲黑杨性别决定基因位点进行精细定位，然后利用自然群体材料开展全基因组关联分析，结合转录组及基因组甲基化测序，首次公开杨树促雌基因FERR和抑雌基因FERR-R，FERR-R基因不编码蛋白，而是通过产生siRNAs对促雌基因FERR的启动序列进行甲基化并对其转录本进行剪切，从而抑制促雌基因FERR在杨树雄株中的表达。而杨树雌株不含FERR-R基因，FERR表达不受FERR-R抑制，所以雌株的雌花发育。本发明提供的杨树促雌基因和抑雌基因可应用于杨树性别早期鉴定及分子育种。
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公开(公告)号：CN110229844A
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201910526176.3
申请日：2019-06-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一种农杆菌介导的培育簸箕柳转基因植株的方法，包括采集花枝、插条与培养、授粉、农杆菌介导花序、播种和GUS染色确定簸箕柳转基因植株等步骤，本发明采用携带pCAMBIA-1305.1-3XHA(带有内含子的GUS)表达载体的农杆菌，制备农杆菌转化液，将其喷洒到授粉后8-24h的花序上侵染花序，之后进行培养，收集种子，然后将种子播种到培养基质上进行培养，待簸箕柳长到4-6cm高之后，取叶片用GUS染色液染色，通过GUS染色检测转基因植株，本发明方法操作容易，转化效率高，克服了簸箕柳农杆菌转化困难的问题，为簸箕柳转基因新品种的开发奠定了基础，该方法还适用于其他灌木柳。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113249295A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110365340.4
申请日：2021-04-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本申请公开了一种测定拟南芥离体花粉萌发率的方法，属于生物技术领域。该方法包括：1)取拟南芥种子，消毒，在1/2MS培养基上播种，培养至萌发第10d，将萌发的幼苗移栽到营养土中生长，直至拟南芥植株抽薹生长至10‑12cm；2)当天采集主茎上开至第14阶段的花朵，用镊子夹着花柄将雄蕊上的花粉涂布在固体培养基中央，然后将花倒置在花粉涂布的边缘位置，控温保湿，将培养皿倒置在培养箱中暗培养；进行显微观察和花粉萌发率统计。本申请操作便捷，花粉用量更少，对花粉损伤更小，花粉萌发效率高，重复性好，为花粉萌发活力及育性的快速鉴定提供一种有效途径，为研究花粉组织特异的基因功能提供一种有效手段。
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公开(公告)号：CN115491383A
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN202211186282.X
申请日：2022-09-27
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种“南林895杨”外源基因高效瞬时转化体系的建立方法，属于生物技术领域。本发明针对“南林895”组培苗叶片特性建立了最适配比的酶解溶液和最佳酶解时间，以及通过对叶片进行暗培养、调整孵化温度时间、转化温度、转化使用的混匀仪器等条件，获得了大量原生质体和提高了转化效率，大大缩短了工作时间，并且重复性极好。本发明提供的“南林895”外源基因瞬时转化体系的建立方法，为原生质体瞬时转化及基因表达特性的研究提供了一种有效途径，为研究亚细胞定位、蛋白质‑蛋白质相互作用、染色质免疫沉淀、蛋白质印迹、单细胞测序和基因组编辑等领域技术提供前提，也为其它非模式植物外源基因瞬时转化体系的建立提供参考。
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公开(公告)号：CN113249295B
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202110365340.4
申请日：2021-04-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本申请公开了一种测定拟南芥离体花粉萌发率的方法，属于生物技术领域。该方法包括：1)取拟南芥种子，消毒，在1/2MS培养基上播种，培养至萌发第10d，将萌发的幼苗移栽到营养土中生长，直至拟南芥植株抽薹生长至10‑12cm；2)当天采集主茎上开至第14阶段的花朵，用镊子夹着花柄将雄蕊上的花粉涂布在固体培养基中央，然后将花倒置在花粉涂布的边缘位置，控温保湿，将培养皿倒置在培养箱中暗培养；进行显微观察和花粉萌发率统计。本申请操作便捷，花粉用量更少，对花粉损伤更小，花粉萌发效率高，重复性好，为花粉萌发活力及育性的快速鉴定提供一种有效途径，为研究花粉组织特异的基因功能提供一种有效手段。
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公开(公告)号：CN111100868B
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN201911307086.1
申请日：2019-12-17
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/02 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了一种美洲黑杨的促雌基因FERR和抑雌基因FERR‑R及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过家系连锁分析对美洲黑杨性别决定基因位点进行精细定位，然后利用自然群体材料开展全基因组关联分析，结合转录组及基因组甲基化测序，首次公开杨树促雌基因FERR和抑雌基因FERR‑R，FERR‑R基因不编码蛋白，而是通过产生siRNAs对促雌基因FERR的启动序列进行甲基化并对其转录本进行剪切，从而抑制促雌基因FERR在杨树雄株中的表达。而杨树雌株不含FERR‑R基因，FERR表达不受FERR‑R抑制，所以雌株的雌花发育。本发明提供的杨树促雌基因和抑雌基因可应用于杨树性别早期鉴定及分子育种。
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公开(公告)号：CN110777153B
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN201911307704.2
申请日：2019-12-17
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/82 , A01H5/02 , A01H6/00 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了一种美洲黑杨促雄基因MmS及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明公开的美洲黑杨雄性特异的促雄基因MmS不编码蛋白，而是作为miRNA海绵吸附miRNA，通过降低所吸附的自由miRNA的浓度，从而使下游靶基因表达量上调。MmS基因在杨树雄株中以半合子的形式存在，仅存在于Y染色单体上，X染色单体不含该基因。促雄基因使杨树雄株雄花发育，而杨树雌株不含该基因，所以杨树雌株的雄性花器官不发育。杨树雄株达到性成熟年龄后会产生大量花粉，造成严重环境污染，在杨树雄株中敲除MmS基因，可以培育不产生花粉的杨树新品系，也可在植物中导入该基因，促进雄花发育，该基因在杨树育种中具有重要的应用价值。
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