乳腺特异表达人杀菌通透性增强蛋白载体构建方法

    公开(公告)号:CN102676581A

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN201210100640.0

    申请日:2012-04-07

    Abstract: 本发明公开了一种乳腺特异表达人杀菌通透性增强蛋白载体构建方法,属于生物工程技术领域。体外合成包括目的基因hBPI的CDS序列,该CDS序列上游添加了XhoI酶切位点、Kozak序列、牛β-酪蛋白信号肽,下游添加了XhoI酶切位点;并将此体外合成序列定向克隆至经XhoI酶切的pBC1-loxp-neo-loxp-pBD载体;经菌液PCR和测序验证,获得了构建正确的人杀菌/通透性增强蛋白乳腺特异表达载体pBC1-loxp-Neo-loxp-hBPI。本发明经细胞C-127水平的功能验证表明该载体基因构建合理、有效,这将为成功制作动乳腺生物反应器生产hBPI蛋白奠定了坚实的基础。

    山羊乳腺上皮细胞的建系方法

    公开(公告)号:CN102660494A

    公开(公告)日:2012-09-12

    申请号:CN201210113304.X

    申请日:2012-04-17

    Abstract: 本发明公开了一种山羊乳腺上皮细胞建系方法。该方法在取材上选用了妊娠期山羊乳房组织;采用组织快法在普通细胞培养皿进行原代培养,将组织块干涸培养时间适当延长;干涸培养结束后立即添加适量乳腺上皮细胞培养液,后期半量换液,直至细胞铺满皿底;通过胰酶差速消化法纯化乳腺上皮细胞;使用高密度连续传代培养法建立起山羊乳腺上皮细胞系并冷冻保存。所述普通细胞培养皿未使用胶原覆盖;乳腺上皮细胞培养液中仅添了FBS、ITS、EGF。本发明具有简单、高效、低成本的建立山羊乳腺上皮细胞系的优点,为开展山羊乳腺发育、泌乳调控机制、乳腺生物反应器等研究提供大量极易获得的材料。

Patent Agency Ranking