公开(公告)号：CN116376984A

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202211167796.0

申请日：2022-09-23

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 支灵通 ,  张子康 ,  高晴 ,  王星 ,  何文辉 ,  郭长江 ,  牛志远 ,  张璇 ,  朱武凌

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/62 ,  C12N5/10 ,  C12N5/0783 ,  A61K35/17 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明涉及一种双靶向增强型抗肿瘤NK细胞及其制备方法，包括：合成目的质粒片，所述目的质粒包括依次串联的表达以下氨基酸的基因片段：PD‑L1纳米抗体、NKG2D胞外段、CD28跨膜段及胞内段、共刺激分子41BB、CD3ζ，再将上述目的质粒克隆构建到慢病毒载体上；通过制备慢病毒来侵染NK92细胞，得到稳定表达上述目的质粒基因的NK92细胞株。本发明对NK92细胞进行改造修饰，构建一种多靶点、增强型抗肿瘤NK细胞，PD‑L1纳米抗体的加入增强了CAR‑NK对肿瘤细胞的靶向性，NKG2D、CD28、41BB、CD3ζ逆转了可溶性MICA/B对NK细胞负性作用的同时增强NK92细胞的激活，得到一种新型的抗肿瘤NK细胞，以增强其抗肿瘤免疫效应。

公开(公告)号：CN116478931A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310550765.1

申请日：2023-05-16

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 支灵通 ,  高晴 ,  张璇 ,  郭长江 ,  牛志远 ,  朱武凌 ,  李永海 ,  王宇

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/62 ,  A61K39/00 ,  A61P35/00 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高亲和型抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用；本发明设计haPD1高亲和型嵌合转换受体转染改造的NK92细胞，其中高亲和型嵌合转换受体包括haPD‑1胞外段、CD28跨膜段、DAP10胞内段、CD3ζ胞内段；本发明通过重组慢病毒载体的构建，慢病毒的包装以及慢病毒转染NK92细胞；制备获得haChR3‑NK92细胞。本发明haPD‑1作为CAR结构的胞外识别域，与肿瘤细胞上的PD‑L1特异性结合，以实现更强的肿瘤杀伤作用；共刺激分子CD28作为跨膜区，以将胞外的信息传递到胞内，将NK细胞表面的激活性受体NKG2D的接头蛋白DAP10融入胞内，另外再嵌入CAR设计常用的胞内段CD3ζ，共同促进NK细胞的激活；本发明的制备方法能够成功构建haChR3‑NK92细胞，能够实现目的质粒的表达，并应用在抗肿瘤药物研究中。