公开(公告)号：CN103160493A

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110422779.2

申请日：2011-12-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  刘合栋

IPC: C12N15/01 ,  C12N13/00 ,  C12N1/20 ,  C12R1/19

Abstract: 一种快速消除大肠杆菌抗生素抗性质粒的方法，主要用于将大肠杆菌中的抗生素抗性质粒快速有效地从大肠杆菌中消除掉。通过采用将大肠杆菌进行电击的方法获得消除抗生素抗性质粒的大肠杆菌，并采用特殊的电击缓冲液促进抗生素抗性质粒的消除，提高质粒消除率。细胞处于电场中时，电压达到某一临界值，细胞膜局部被击穿，形成瞬时的孔洞，孔径大小可以使质粒从细胞中排出，电击结束后，损伤的细胞膜又可以自我修复；电击缓冲液的碱金属通过与细胞膜结合从而促进细胞膜的击穿，使得胞内质粒更容易泄露出来。最终的质粒消除率可达到93％。

公开(公告)号：CN103509813A

公开(公告)日：2014-01-15

申请号：CN201210203625.9

申请日：2012-06-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  刘合栋 ,  袁春伟

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了一种利用重组大肠杆菌发酵生产L-4-羟脯氨酸的方法，该重组大肠杆菌由如下方法构建：根据公布的脯氨酸-4-羟化酶基因和色氨酸启动子序列，先优化设计色氨酸串联启动子和脯氨酸-4-羟化酶结构基因，然后全基因合成色氨酸串联启动子基因和脯氨酸-4-羟化酶结构基因后，将启动子和结构基因连接到pAMP质粒上，构建了可过量表达脯氨酸-4-羟化酶的重组质粒pAMP-P2trp-Hyp。本发明还公开了所述大肠杆菌在生产4-羟基脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，本发明的重组大肠杆菌的4-羟基脯氨酸的产量达到0.31g/L，提示该重组菌具有良好的工业开发前景。

公开(公告)号：CN103160535A

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110421135.1

申请日：2011-12-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  刘合栋

IPC: C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 一种将穿梭质粒导入嗜醋酸棒杆菌的电转化方法，主要用于将大肠杆菌和嗜醋酸棒杆菌中穿梭表达的重组质粒快速有效地电转化导入嗜醋酸棒杆菌中。通过控制培养基的组成、细胞培养时间、氨苄青霉素处理时间和加入量、质粒的甲基化、热击时间和热击温度、电击条件来制备高效电转化感受态细胞，减弱嗜醋酸棒杆菌细胞壁对穿梭质粒的阻碍作用，并减少嗜醋酸棒杆菌对穿梭质粒的限制性酶切作用，使得穿梭质粒能够通过电转化方法高效地导入到嗜醋酸棒杆菌中，电转化效率可达到6.4×104cfu/μg DNA。

公开(公告)号：CN104278047A

公开(公告)日：2015-01-14

申请号：CN201310283918.7

申请日：2013-07-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 张震宇 ,  刘合栋 ,  张胜利

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/77 ,  C12N15/78 ,  C12N15/75 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P13/24 ,  C12R1/19

Abstract: 公开了一种使含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统活性增强的方法。其中，含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统是在2-酮戊二酸和亚铁离子存在下，作用于游离的L-脯氨酸并生成反式-4-羟脯氨酸的具有脯氨酸4-羟化酶活性的重组微生物。同时，本发明还提供反式-4-羟脯氨酸的生物合成方法。