一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

    公开(公告)号:CN108866009A

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201810934313.2

    申请日:2018-08-16

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507及其应用,属于食品安全免疫检测技术领域。本发明甲霜灵完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化完全,通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫(100μg/只)用完全弗氏佐剂,多次加强免疫(50μg/只)用不完全弗氏佐剂,最后一次用甲霜灵完全抗原(25μg/只,不含佐剂)冲击免疫。取高效价的IC50小鼠的脾细胞,通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合,经过间接竞争酶联免疫法筛选和三次亚克隆,得到甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507。此细胞株分泌的单克隆抗体,对甲霜灵具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为40 ng/mL),为食品中甲霜灵残留的免疫检测提供了原料,具有实际应用价值。

    提高重组大肠杆菌中2’-岩藻糖基乳糖产量的方法

    公开(公告)号:CN112322565B

    公开(公告)日:2023-11-10

    申请号:CN202011240682.5

    申请日:2020-11-09

    Abstract: 本发明公开了一种提高重组大肠杆菌中2’‑岩藻糖基乳糖产量的方法,属于基因工程技术领域。本发明采用柔性Linker将四种不同蛋白标签分别融合在α‑1,2‑岩藻糖基转移酶FutC的N端,构建的融合蛋白FP‑futC可以不同程度地提高α‑1,2‑岩藻糖基转移酶催化合成2'‑FL的产量。其中,采用TrxA‑futC融合蛋白合成2'‑FL的产量最高,达到2.94g/L,底物乳糖的消耗达到3.55g/L,乳糖转化率为0.58mol/mol。而在对照组中,不加蛋白标签构建的质粒pMA09‑futC获得的重组大肠杆菌合成2'‑FL的产量仅为1.71g/L,乳糖消耗量为2.88g/L,乳糖转化率仅为0.42mol/mol。进一步将TrxA‑futC融合蛋白基因整合至大肠杆菌MG1655基因组上的yjiP位点,获得一株无质粒的2'‑FL基因工程菌株MG‑26△yjiP::trxA‑futC,摇瓶发酵后2'‑FL的产量达到3.85g/L,乳糖转化率为0.68mol/mol。

    一种生产2′-岩藻糖基乳糖的多层动态调控系统及其应用

    公开(公告)号:CN116732075A

    公开(公告)日:2023-09-12

    申请号:CN202310683330.4

    申请日:2023-06-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种生产2′‑岩藻糖基乳糖的多层动态调控系统及其应用,属于生物技术领域。本发明构建的多层动态调控系统包括:组成型表达的靶向2′‑岩藻糖基乳糖合成相关基因的第一crRNA,组成型表达的靶向中心碳代谢相关基因的第二crRNA,组成型表达的调节因子LsrR,由诱导型启动子PlsrA调控的缺陷型核酸酶dCas12a,其中,上调2′‑岩藻糖基乳糖合成相关基因manB、manC、gmd、fcl、rcsA的表达,下调中心碳代谢相关基因pfkA的表达。本发明的动态调控系统有效缓解了中心碳代谢和2'‑FL从头合成途径对胞内营养物质的竞争性消耗而造成的细胞代谢压力,同时大大提高了目标产物的产量,对大肠杆菌细胞工厂合成2'‑FL的研究有着重要的意义。

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