公开(公告)号：CN114277058B

公开(公告)日：2025-01-14

申请号：CN202111628722.8

申请日：2021-12-28

Applicant: 滨州医学院

Inventor： 王大鹏

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及RNA干扰技术领域，尤其是涉及一种RNA干扰病毒载体，此RNA干扰病毒载体通过表达基于人类miR‑30pri‑miRNA的miR‑AB框架携带的shRNAmir来干扰靶基因的表达；所述miR‑AB序列由多种真核启动子来调控；所述RNA干扰病毒载体通过荧光蛋白报告分子示踪发生RNA干扰的细胞，或通过抗生素筛选发生RNA干扰的细胞。其中，RNA干扰病毒载体中的miR‑AB序列由多种真核启动子来调控，从而有利于其在多种真核细胞中的应用，而病毒载体既可以依赖其Puromycin抗性来通过抗生素筛选发生RNA干扰的细胞，也可以依赖其荧光蛋白报告分子来示踪发生RNA干扰的细胞。因此，其能够通过多种病毒共感染方式来对真核细胞中多个靶基因同时进行单基因干扰和多基因任意组合干扰，从而同时分析多个靶基因在真核细胞中的功能。

公开(公告)号：CN114277058A

公开(公告)日：2022-04-05

申请号：CN202111628722.8

申请日：2021-12-28

Applicant: 滨州医学院

Inventor： 王大鹏

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及RNA干扰技术领域，尤其是涉及一种RNA干扰病毒载体，此RNA干扰病毒载体通过表达基于人类miR‑30pri‑miRNA的miR‑AB框架携带的shRNAmir来干扰靶基因的表达；所述miR‑AB序列由多种真核启动子来调控；所述RNA干扰病毒载体通过荧光蛋白报告分子示踪发生RNA干扰的细胞，或通过抗生素筛选发生RNA干扰的细胞。其中，RNA干扰病毒载体中的miR‑AB序列由多种真核启动子来调控，从而有利于其在多种真核细胞中的应用，而病毒载体既可以依赖其Puromycin抗性来通过抗生素筛选发生RNA干扰的细胞，也可以依赖其荧光蛋白报告分子来示踪发生RNA干扰的细胞。因此，其能够通过多种病毒共感染方式来对真核细胞中多个靶基因同时进行单基因干扰和多基因任意组合干扰，从而同时分析多个靶基因在真核细胞中的功能。

公开(公告)号：CN114277030B

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202111625761.2

申请日：2021-12-28

Applicant: 滨州医学院

Inventor： 王大鹏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明涉及RNA干扰技术领域，尤其是涉及一种基于人类miR‑30的pri‑miRNA改良序列及表达该序列的载体，pri‑miRNA改良序列的茎部引入了BamHI和Apal限制性内切酶识别位点。本发明对pri‑miRNA的序列即shRNAmir的框架进行改造，在不影响其生物学加工的前提下，对pri‑miRNA茎部的基因特异性shRNA序列两端进行改良，将其部分原始序列替换成了BamHI和Apal限制性内切酶识别位点，即BamHI和ApaI两个限制性内切酶的识别位点之间只有shRNA序列，从而保证克隆过程中只克隆很短的基因特异shRNA序列，后者即可以利用DNA寡核苷酸化学合成技术来合成，有效避免了pri‑miRNA基础序列被克隆进去的问题，确保了克隆的高效性和准确性。

公开(公告)号：CN114277030A

公开(公告)日：2022-04-05

申请号：CN202111625761.2

申请日：2021-12-28

Applicant: 滨州医学院

Inventor： 王大鹏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明涉及RNA干扰技术领域，尤其是涉及一种基于人类miR‑30的pri‑miRNA改良序列及表达该序列的载体，pri‑miRNA改良序列的茎部引入了BamHI和Apal限制性内切酶识别位点。本发明对pri‑miRNA的序列即shRNAmir的框架进行改造，在不影响其生物学加工的前提下，对pri‑miRNA茎部的基因特异性shRNA序列两端进行改良，将其部分原始序列替换成了BamHI和Apal限制性内切酶识别位点，即BamHI和ApaI两个限制性内切酶的识别位点之间只有shRNA序列，从而保证克隆过程中只克隆很短的基因特异shRNA序列，后者即可以利用DNA寡核苷酸化学合成技术来合成，有效避免了pri‑miRNA基础序列被克隆进去的问题，确保了克隆的高效性和准确性。