公开(公告)号：CN118345028A

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202410558398.4

申请日：2024-05-07

Applicant: 滨州医学院烟台附属医院

Inventor： 甘建 ,  纪翠锋 ,  全无暇 ,  王江涛 ,  缪延栋 ,  时巍巍

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明属于细胞技术领域，涉及小鼠肝脏多种原代细胞的分离，是一种用于小鼠肝细胞、肝星状细胞和肝单个核细胞分离和纯化的简易可行方案，适用于一般实验室的小鼠体内相关细胞分离及进一步培养。本发明所提供的方法核心是在小鼠下腔静脉插管的基础上使用胶原酶溶液进行灌注消化，随后经过一系列分离和连续纯化步骤，实现小鼠肝脏中肝细胞、肝星状细胞和肝单个核细胞等多种原代细胞的获取。该发明一定程度上克服了目前肝脏细胞分离方法单一，兼顾了高效、经济，又能避免实验动物滥用的特点，从而为相关肝病体外实验的开展奠定坚实基础。

公开(公告)号：CN118497125A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410533782.9

申请日：2024-04-29

Applicant: 滨州医学院烟台附属医院

Inventor： 甘建 ,  纪翠锋 ,  姜伟炜 ,  李乾坤 ,  刘翠翠 ,  汤先丽

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明涉及细胞分离培养领域，特别涉及一种小鼠肝脏来源iNKT细胞的分离和培养方法，分离出的原代iNKT细胞可应用于免疫介导的肝损伤研究，用以模拟人类自身免疫性肝炎发生发展过程。本发明涉及的方法具体包括以下步骤：将小鼠麻醉后采用胶原酶溶液灌注消化肝脏得到细胞悬液，通过一系列密度梯度分离纯化步骤得到肝单个核细胞，经分选型流式细胞仪分选出iNKT细胞，iNKT细胞用改良RPMI‑1640培养基培养，并往其中加入鼠白介素‑2细胞因子、白介素‑7细胞因子、鼠白介素‑12细胞因子和可溶性抗CD‑28抗体用以刺激iNKT细胞扩增，经历为期3周的培养周期后可使iNKT细胞数量达到百万级以上，满足基础和临床研究需求。