公开(公告)号：KR100885854B1

公开(公告)日：2009-02-26

申请号：KR1020060118102

申请日：2006-11-28

Applicant: 고려대학교 산학협력단

Inventor： 김종훈 ,  심중현

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/02 ,  A61K35/39

Abstract: 본 발명은 인간배아 줄기세포로부터 배아체가 형성되는 과정에서 혈청, 액티빈 (activin A) 및 레티노산 (retinoic acid)을 순차적으로 처리하여 췌장내배엽이 증가된 배아체를 유도하고, 이를 췌장으로 분화 가능한 췌장전구세포로 분화를 촉진시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 이미 어느 정도 분화가 진행된 성체줄기세포와는 달리 배아줄기세포는 여러 단계의 분화과정을 거쳐 기능성 체세포로 분화가 되며, 각 단계에서 원치 않는 세포로 분화될 가능성이 있으므로, 초기 내배엽으로의 효과적인 단계별 분화촉진 및 이에 뒤따르는 췌장세포로 분화시킬 수 있다. 또한, 배아줄기세포로부터 내배엽으로의 분화를 우선적으로 촉진시킨 뒤, 췌장세포로의 분화를 유도할 경우 기존의 분화유도방법보다 췌장세포로의 분화수율을 증가시켜 대량의 췌장베타세포를 획득할 수 있다.
인간배아 줄기세포, 췌장전구세포, 혈청, 액티빈, 레티노산, 췌장 내배엽, 배아체, 췌장베타세포

公开(公告)号：KR1020080023081A

公开(公告)日：2008-03-12

申请号：KR1020060118102

申请日：2006-11-28

Applicant: 고려대학교 산학협력단

Inventor： 김종훈 ,  심중현

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/02 ,  A61K35/39

Abstract: A method for inducing the differentiation from human embryonic stem cells to pancreatic progenitor cells is provided to inhibit differentiation of human embryonic stem cells to undesired cells, and produce a large quantity of pancreatic beta cells from the pancreatic progenitor cells by increasing differentiation yield, so that the pancreatic progenitor cells are useful for treatment of diabetes. A method for inducing the differentiation from human embryonic stem cells to pancreatic progenitor cells comprises the steps of: treating the human embryonic stem cells with serum by culturing in a medium containing 15-25% of serum for 3-5 days to induce three germ layer embryoid bodies; treating the three germ layer embryoid bodies with 25-35 ng/ml of activin A and culturing them for 3-5 days to induce endoderm embryoid bodies; treating the endoderm embryoid bodies with 5-15 muM of retinoic acid and culturing them for 1-3 days to induce pancreatic endoderm-increased embryoid bodies; and attaching the pancreatic endoderm-increased embryoid bodies to a culture dish and culturing them in serum free medium containing ITS(a 4-6 mg/l of insulin, a 40-60 mg/l of transferrin and a 0.4-0.6 mg/l of selenite) and 3-7 mug/ml of fibronectin for 10-15 days.

Abstract translation: 提供诱导从人胚胎干细胞分化为胰腺祖细胞的方法，以抑制人胚胎干细胞分化为不期望的细胞，并通过增加分化产量从胰腺祖细胞产生大量胰腺β细胞，使得 胰腺祖细胞可用于治疗糖尿病。 诱导从人胚胎干细胞分化为胰腺祖细胞的方法包括以下步骤：用含有15-25％血清的培养基培养3-5天，用血清处理人胚胎干细胞，诱导三胚层 胚状体 用25-35ng / ml激活素A处理三个胚层胚状体并培养3-5天以诱导内胚层胚状体; 用5-15μM视黄酸处理内胚层胚状体并培养1-3天以诱导胰腺内胚层增生的胚状体; 并将胰腺内胚层增殖的胚状体附着到培养皿中并在含有ITS（4-6mg / l胰岛素，40-60mg / l转铁蛋白和0.4-0.6mg / l）的无血清培养基中培养 的亚硒酸盐）和3-7ug / ml的纤连蛋白10-15天。