금속 친화성 크로마토그래피를 이용한 O-GlcNAc 펩타이드의 분리 및 동정 방법
    2.
    发明授权

    公开(公告)号:KR101337064B1

    公开(公告)日:2013-12-09

    申请号:KR1020110110018

    申请日:2011-10-26

    Abstract: 본 발명은 단백질의
    O- GlcNAcylation에 대한 정보를 내포하는
    O- GlcNAc 펩타이드의 분리 및 동정 방법에 관한 것이다.
    본 발명에 따르면, 펩타이드의 세린 또는 트레오닌 잔기에 결합되어 있는 인산기 또는
    O- GlcNAc의 화학적 변형 없이 쉽고 빠르게
    O- GlcNAc 펩타이드를 인산화 펩타이드와 분리해 낼 수 있을 뿐만 아니라 분리된
    O- GlcNAc 펩타이드의 서열 및
    O- GlcNAc의 수식화 위치를 규명할 수 있다. 따라서 본 발명은
    O- GlcNAc 펩타이드의 분석을 통한 새로운 질병 메커니즘 연구, 치료제 및 진단용 마커의 개발 등에 유용하게 활용될 수 있다.

    금속 친화성 크로마토그래피를 이용한 O-GlcNAc 펩타이드의 분리 및 동정 방법
    3.
    发明公开

    公开(公告)号:KR1020130047782A

    公开(公告)日:2013-05-09

    申请号:KR1020110110018

    申请日:2011-10-26

    Abstract: PURPOSE: A method for isolating and identifying O-GlcNAc peptide using metal-affinity chromatography is provided to quickly and easily isolate O-GlcNAc peptide from phosphorylated peptide without chemical modification, and to identify the peptide sequence and modification site from the isolated O-GlcNAc peptide. CONSTITUTION: A method for isolating and identifying O-GlcNAc peptide comprises: a step of performing metal-affinity chromatography of a sample containing a phosphorylated peptide and O-GlcNAc peptide; and a step of adsorbing and removing the phosphorylated peptide onto a column. Metals used for metal affinity chromatography are TiO_2, ZrO_2, GaO_4, or FeO_2. The method also comprises: a step of adding a dithiothreitol(DTT) affinity tag to O-GlcNAc peptide in the sample by BEMAD method; and a step of purifying O-GlcNAc peptide using thiol affinity chromatography. The method further comprises a step of analyzing O-GlcNAc peptide by LC-MS(liquid chromatography-mass spectrometry). [Reference numerals] (AA) Target sample to be analyzed; (BB) Metal affinity chromatography; (CC) O-GlcNac peptide containing sample; (DD) BEMAD method; (EE) DTT added peptide; (FF) Thiol chromatography, LC-MS/MS mass spectrometry; (GG) O-GlcNac peptide

    Abstract translation: 目的:提供使用金属亲和层析分离和鉴定O-GlcNAc肽的方法,以快速方便地将O-GlcNAc肽从磷酸化肽中分离而无需化学修饰,并从分离的O-GlcNAc中鉴定肽序列和修饰位点 肽。 构成:用于分离和鉴定O-GlcNAc肽的方法包括:对含有磷酸化肽和O-GlcNAc肽的样品进行金属亲和层析的步骤; 以及将磷酸化肽吸附并除去到柱上的步骤。 用于金属亲和层析的金属是TiO_2,ZrO_2,GaO_4或FeO_2。 该方法还包括:通过BEMAD方法向样品中的O-GlcNAc肽添加二硫苏糖醇(DTT)亲和标签的步骤; 和使用硫醇亲和层析纯化O-GlcNAc肽的步骤。 该方法还包括通过LC-MS(液相色谱 - 质谱)分析O-GlcNAc肽的步骤。 (标号)(AA)要分析的目标样品; (BB)金属亲和色谱法; (CC)O-GlcNac肽样品; (DD)BEMAD方法; (EE)DTT添加肽; (FF)硫醇色谱,LC-MS / MS质谱; (GG)O-GlcNac肽

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