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公开(公告)号：KR1020170081101A
公开(公告)日：2017-07-11
申请号：KR1020150191846
申请日：2015-12-31
Applicant: 수원대학교산학협력단
Abstract: 본발명은시판되는소 췌장에서분리정제된 DNase I을 0.02 mM ~ 6 M의 Ca또는 Mn또는 Mg이온이포함된 pH 4 ~ 10의완충용액에녹이는단계; 상기 DNase I을녹인용액을 15 ~ 62 ℃에서 10 분 ~ 1 달동안 1차배양하는단계; 및상기 1차배양에의해단백질가수분해효소의자가분해가끝난 DNase I을녹인용액에세린단백질가수분해효소억제제를 0.01 ~ 100 mM 되도록첨가하거나, 세린단백질가수분해효소억제제가포함된인히비터칵테일(inhibitor cocktail)을 0.01 ~ 15 X가되도록첨가하는단계;를포함하는, DNase I의활성을유지하면서이에오염된단백질가수분해효소및 그전구체의활성제거방법에관한것이다. 본발명에따르면, DNase I을적절한수소이온농도와 Ca또는 Mn또는 Mg이온의존재하에단백질가수분해효소의작용으로부터 DNase I을보호하면서, 단백질가수분해효소의자가분해(autodigestion) 방법과세린단백질가수분해효소억제제또는이를포함하는인히비터칵테일중 하나를처리하는방법을병행함으로써, DNase I의활성은유지하면서도, DNase I에오염되어있는단백질가수분해효소와그 전구체의활성을완전히제거하여, 보다저렴하게순수제조된 DNase I을이용할수 있도록한다.
Abstract translation: 本发明包括一步骤，以熔化在0.02毫米〜6的Ca或Mn或pH含Mg离子4〜10的M的缓冲溶液分离并纯化的由市售的牛胰DNA酶I; 在15至62℃下培养DNA酶I溶液10分钟至1个月; 并且在通过初级培养物溶解蛋白酶的自身降解的DNA酶I或添加含有丝氨酸蛋白酶抑制剂的抑制剂混合物获得的溶液中含有0.01至100mM的丝氨酸蛋白酶抑制剂 意愿，在保持DNA酶I包含上的有源去除的蛋白水解酶和它们与之污染前体的活性; 0.01〜15 X的增加的步骤的（抑制剂混合物）。 根据本发明，自分解（自身消化）方法和蛋白水解酶的丝氨酸蛋白水解，同时保护DNA酶I从蛋白水解酶的用DNase I的作用在合适的pH和Ca或Mn或Mg离子的存在下 通过使用蛋白酶抑制剂或含有其的抑制剂混合物之一，可以完全除去蛋白酶及其前体污染的DNA酶I的活性，同时保持DNase I的活性， 使用纯粹以低成本制造的DNase I。
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公开(公告)号：KR101824781B1
公开(公告)日：2018-02-02
申请号：KR1020150191846
申请日：2015-12-31
Applicant: 수원대학교산학협력단
Abstract: 본발명은시판되는소 췌장에서분리정제된 DNase I을 0.02 mM ~ 6 M의 Ca또는 Mn또는 Mg이온이포함된 pH 4 ~ 10의완충용액에녹이는단계; 상기 DNase I을녹인용액을 15 ~ 62 ℃에서 10 분 ~ 1 달동안 1차배양하는단계; 및상기 1차배양에의해단백질가수분해효소의자가분해가끝난 DNase I을녹인용액에세린단백질가수분해효소억제제를 0.01 ~ 100 mM 되도록첨가하거나, 세린단백질가수분해효소억제제가포함된인히비터칵테일(inhibitor cocktail)을 0.01 ~ 15 X가되도록첨가하는단계;를포함하는, DNase I의활성을유지하면서이에오염된단백질가수분해효소및 그전구체의활성제거방법에관한것이다. 본발명에따르면, DNase I을적절한수소이온농도와 Ca또는 Mn또는 Mg이온의존재하에단백질가수분해효소의작용으로부터 DNase I을보호하면서, 단백질가수분해효소의자가분해(autodigestion) 방법과세린단백질가수분해효소억제제또는이를포함하는인히비터칵테일중 하나를처리하는방법을병행함으로써, DNase I의활성은유지하면서도, DNase I에오염되어있는단백질가수분해효소와그 전구체의활성을완전히제거하여, 보다저렴하게순수제조된 DNase I을이용할수 있도록한다.
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