公开(公告)号：KR100856511B1

公开(公告)日：2008-09-04

申请号：KR1020060047714

申请日：2006-05-26

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 최윤재 ,  강상기 ,  김민국 ,  우정희 ,  최승훈

IPC: C12Q1/70 ,  C07K7/06

Abstract: 본 발명은 1) 파지-펩타이드 라이브러리를 형성시키는 단계; 2) 파지-펩타이드 라이브러리를 래트에 경구 주입하는 단계; 3) 상기 래트를 혈액관주시키는 단계; 4) 관주종료 후 래트로부터 장기를 적출하여 조직 샘플을 채취하여 세척하고 균질화시키고 중화시킨 후 적정하는 단계; 5) 상기 샘플로부터 파지를 정량하는 단계; 및 6) 상기에서 분리한 파지를 적정하여 파지 DNA를 분리해내고, DNA의 염기서열을 분석하여 펩타이드 작용기를 동정하는 단계로 구성되는 파지 디스플레이 방법에 있어서, 상기 2) 내지 5)의 단계를 3회 이상 반복하여 바이오패닝을 실시하고, 바이오패닝 후 소장 점막층을 통과하여 들어오는 파지를 간, 폐, 콩팥, 지라와 같은 다수의 조직 및 기관에서 동정하며, 상기 단계 4)에서 균질화 과정 후 산성 용리과정을 추가하여 소장 점막층 통과 후 특정 조직에 특이적으로 결합하는 기관 표적형 펩타이드를 동정할 수 있도록 한 것을 특징으로 하는 경구 파지 디스플레이 방법 및 이를 이용하여 동정한 소장 상피세포 흡수촉진 유도 펩타이드, 및 상기 소장 상피세포 흡수촉진 펩타이드를 단백질계 약물에 도입시킨 경구 투약 시스템에 관한 것으로, 본 발명의 경구 파지 디스플레이 방법을 이용할 경우 가장 높은 빈도수로 소장 점막층을 통과하는 최적의 흡수효율을 보인 펩타이드를 동정할 수 있고, 이 펩타이드를 단백질 약물에 도입한 경구 투약 시스템에 의해 생체막에서의 흡수효율을 획기적으로 증진시켜 단백질 약물의 이용성 확대와 더불어 의학, 약학, 축산 및 수의 분야에 지대한 파급효과를 가져올 수 있다.
경구투약시스템, 소장점막층, 수용체매개물질흡수기전, 트랜스사이토시스, 파지디스플레이, 소장상피세포흡수촉진유도 펩타이드

公开(公告)号：KR1020070113871A

公开(公告)日：2007-11-29

申请号：KR1020060047714

申请日：2006-05-26

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 최윤재 ,  강상기 ,  김민국 ,  우정희 ,  최승훈

IPC: C12Q1/70 ,  C07K7/06

CPC classification number: C07K7/06 ,  A61K38/08

Abstract: A method for displaying a peroral phage is provided to identify a peptide showing an optimum absorption efficiency passing through small intestine mucosa at highest frequency. And a peroral administration system in which the identified peptide is introduced is provided to increase the absorption efficiency of a protein drug into a bio-membrane significantly, thereby enlarging the usability of the protein drug. A method for displaying a peroral phage comprises the steps of: (a) forming a phage-peptide library; (b) perorally injecting the library into a rat; (c) blood-irrigating the rat; (d) after taking organs from the rat and taking a tissue sample therefrom, washing and homogenizing the sample, neutralizing it and then titrating it; (e) quantifying phage from the sample; and (f) after titrating the separated phage to separate phage DNA therefrom, analyzing a sequence of the DNA to identify a peptide functional group and is characterized in that the steps (b) to (e) are repeated more than 3 times to perform a biopanning, the phage passing through small intestine mucosa after the biopanning is identified at various tissues and organs such as liver, lung, heat, spleen and blood, and an acid elution step after the homogenization step(d) is added to identify an organ targeting peptide specifically bound to a specific tissue after passing through the small intestine mucosa. A peptide identified by the method and inducing the absorption promotion of small intestinal epithelium includes an amino acid sequence of CSKSSDYQC. A peroral administration system is characterized in that the peptide inducing the absorption promotion of small intestinal epithelium is introduced into a protein-based drug.

Abstract translation: 提供了显示口腔噬菌体的方法，以鉴定以最高频率显示通过小肠粘膜的最佳吸收效率的肽。 并且提供其中引入鉴定的肽的口服给药系统，以显着增加蛋白质药物对生物膜的吸收效率，从而增加蛋白质药物的可用性。 用于显示口腔噬菌体的方法包括以下步骤：（a）形成噬菌体肽文库; （b）向图书馆口头注射大鼠; （c）对大鼠进行血液灌洗; （d）从大鼠取出器官并从其中取出组织样品后，洗涤并均匀样品，中和，然后滴定; （e）从样品中量化噬菌体; 和（f）滴定分离的噬菌体以分离噬菌体DNA后，分析DNA的序列以鉴定肽官能团，其特征在于重复步骤（b）至（e）3次以进行 在生物淘选之后，在各种组织和器官如肝，肺，热，脾和血液上鉴定生物淘选后通过小肠粘膜的噬菌体，并且在均匀化步骤（d）之后加入酸洗脱步骤以鉴定器官靶向 通过小肠粘膜后特异性结合于特定组织的肽。 通过该方法鉴定并诱导小肠上皮吸收促进的肽包括CSKSSDYQC的氨基酸序列。 口服给药系统的特征在于将诱导小肠上皮吸收促进的肽引入蛋白质类药物中。