公开(公告)号：KR100958921B1

公开(公告)日：2010-05-19

申请号：KR1020070110250

申请日：2007-10-31

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 최영민 ,  장지호 ,  문신용 ,  오선경

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/02 ,  C12N5/00

Abstract: 본 발명은 감마 시크레타제 저해제 처리 및 배양액의 부피 조절을 이용한 인간 배아줄기세포의 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 촉진방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인간 배아줄기세포를 미분화 상태로 배양하는 제1단계; 및 미분화된 인간 배아줄기세포에 감마 시크레타제 저해제를 처리하고 부피를 줄인 배양액에서 분화시키는 제2단계를 포함함으로써, 종래의 분화 방법과 달리 배아체 형성 단계를 거칠 필요가 없이 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 기간을 현저히 단축시킬 수 있고 또한 그 분화 효율도 향상시킬 수 있는, 인간 배아줄기세포의 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 촉진방법에 관한 것이다.
인간 배아줄기세포, 감마 시크레타제 저해제, 심근, 분화

公开(公告)号：KR1020090044247A

公开(公告)日：2009-05-07

申请号：KR1020070110250

申请日：2007-10-31

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 최영민 ,  장지호 ,  문신용 ,  오선경

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/02 ,  C12N5/00

Abstract: 본 발명은 감마 시크레타제 저해제 처리 및 배양액의 부피 조절을 이용한 인간 배아줄기세포의 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 촉진방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인간 배아줄기세포를 미분화 상태로 배양하는 제1단계; 및 미분화된 인간 배아줄기세포에 감마 시크레타제 저해제를 처리하고 부피를 줄인 배양액에서 분화시키는 제2단계를 포함함으로써, 종래의 분화 방법과 달리 배아체 형성 단계를 거칠 필요가 없이 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 기간을 현저히 단축시킬 수 있고 또한 그 분화 효율도 향상시킬 수 있는, 인간 배아줄기세포의 심근 전구체 또는 심근 세포로의 분화 촉진방법에 관한 것이다.
인간 배아줄기세포, 감마 시크레타제 저해제, 심근, 분화

公开(公告)号：KR101331510B1

公开(公告)日：2013-11-20

申请号：KR1020060083017

申请日：2006-08-30

Applicant: 동아에스티 주식회사 ,  재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 도현미 ,  김병문 ,  김원배 ,  오선경 ,  문신용

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/00 ,  C12N5/02

Abstract: 본원 발명은 인간 배아줄기세포용 배지에 있어서 포도당의 함량을 선택적으로 감소시킨 것을 특징으로 하는 인간 배아줄기세포용 배지 조성물을 제공한다. 특히, 본원 발명은 저 농도의 포도당을 함유하는 것을 기본으로 하며 인간 배아줄기세포로부터 인슐린 생산 세포 또는 세포괴를 생산하기 위하여 각 단계별 분화과정을 유도할 수 있게 고안된 배지 조성물을 제공한다.
또한 본원 발명은 상기 배지 조성물을 이용하여 인간 배아줄기세포로부터 인슐린 생산 세포 또는 세포괴로의 분화 유도 방법, 그리고 이에 의해 유도된 인슐린 생산 세포 또는 세포괴에 관한 것이다.
본원 발명에 따르면, 포도당이 저 농도로 함유된 배지 조성물을 사용함으로써 세포가 배양 과정에서 고농도의 포도당 환경에 장기간 노출되면서 얻어지는 최종 단계의 인슐린 생산세포에서 나타날 수 있는 인슐린 내성(tolerance)을 감소시킬 수 있다. 이러한 배지를 사용한 분화 유도는 인간의 발생과정을 모방하면서 분화를 가속화시켜 분화 유도의 효율성을 도모하고 수율을 높이며 분화에 걸리는 시간을 최소화할 수 있다. 또한, 이렇게 얻어지는 인슐린 생산세포는 세포 대체 치료법의 수단은 물론, 약물의 스크리닝, 발생기전의 연구 등 다양한 영역에서 상업적으로 이용될 수 있다.
인슐린 생산세포, 인간 배아줄기세포, 인슐린 생합성, 췌장, 베타세포, 제1형 당뇨병, 글루코오스

公开(公告)号：KR1020080020098A

公开(公告)日：2008-03-05

申请号：KR1020060083017

申请日：2006-08-30

Applicant: 동아에스티 주식회사 ,  재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 도현미 ,  김병문 ,  김원배 ,  오선경 ,  문신용

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/00 ,  C12N5/02

Abstract: A medium composition containing low concentration of glucose for culturing human embryonic stem cells is provided to reduce insulin tolerance of cells shown by long-term exposure to high concentration of glucose environment during cultivation of cells and produce insulin-producing cells having enhanced insulin production yield. A DMEM/F12(Dulbecco's modified eagle medium/Ham's F12) medium composition for inducing differentiation of human embryonic stem cells into insulin-producing cells optionally contains low concentration such as 5-10 mM of glucose, and further contains 10mM of nicotinamide. A method for producing insulin-producing cells or cell clusters differentiated thereby comprises the steps of: (1) culturing undifferentiated human embryonic stem cells in a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose, 15% of serum replacement and 2 ng/mL of FGF-2; (2) floating culturing the cultured cells in a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose and 15% of serum replacement to form embryoid body; (3) inducing differentiation from embryoid body to endodermal stem cells by using a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose, 15% of serum replacement and 50-100 ng/mL of activin A; (4) selecting the differentiated cells to the endodermal stem cells by using a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose, 0.5-2.0 mg/mL of insulin, 0.25-1.0 mg/mL of transferring and 0.25-1.0 mug/mL of sodium selenite; (5) inducing differentiation into precursor cells of insulin-producing cells and their proliferation by using a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose and 5-20ng/mL of betacellulin; (6) inducing differentiation from the precursor cells to insulin-producing cells by using a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose and 10mM of nicotinamide; and (7) inducing insulin-producing cell clusters by using a DMEM/F12 medium containing 5-10mM of glucose and 10mM of nicotinamide.

Abstract translation: 提供含有用于培养人类胚胎干细胞的低浓度葡萄糖的培养基组合物，用于降低细胞培养过程中长时间暴露于高浓度葡萄糖环境时显示的细胞的胰岛素耐受性，并产生具有增强的胰岛素产生产率的胰岛素产生细胞。 用于诱导将人胚胎干细胞分化为胰岛素生成细胞的DMEM / F12（Dulbecco's modified eagle medium / Ham's F12）培养基组合任选地含有低浓度例如5-10mM葡萄糖，并且还含有10mM烟酰胺。 用于产生分化的产生胰岛素的细胞或细胞簇的方法包括以下步骤：（1）在含有5-10mM葡萄糖，15％血清替代物和2ng / mL的DMEM / F12培养基中培养未分化的人胚胎干细胞 的FGF-2; （2）在含有5-10mM葡萄糖和15％血清替代物的DMEM / F12培养基中培养培养的细胞以形成胚状体; （3）通过使用含有5-10mM葡萄糖，15％血清替代物和50-100ng / mL激活素A的DMEM / F12培养基诱导从胚状体到内胚层干细胞的分化; （4）通过使用含有5-10mM葡萄糖，0.5-2.0mg / mL胰岛素，0.25-1.0mg / mL转移和0.25-1.0ug / mL葡萄糖的DMEM / F12培养基来选择分化细胞至内胚层干细胞 的亚硒酸钠; （5）通过使用含有5-10mM葡萄糖和5-20ng / mL的β-细胞素的DMEM / F12培养基诱导分化成胰岛素产生细胞的前体细胞及其增殖; （6）通过使用含有5-10mM葡萄糖和10mM烟酰胺的DMEM / F12培养基诱导从前体细胞分化成胰岛素生成细胞; 和（7）通过使用含有5-10mM葡萄糖和10mM烟酰胺的DMEM / F12培养基诱导产生胰岛素的细胞簇。