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公开(公告)号：KR1019990054117A
公开(公告)日：1999-07-15
申请号：KR1019970073899
申请日：1997-12-26
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C12N15/52
Abstract: 본 발명은 고온성 세균인 바실러스 스티아로더모필러스 SD-1(Bacillus stearothermophilus SD-1, KCTC 8551P)에서 유래한 내열성 D-히단토이나아제(D-hydantoinase)를 암호화하는 신규한 염기서열 및 그로부터 번역되는 아미노산 서열에 관한 것이다. 본 발명의 내열성 D-히단토이나아제는 공지의 상온균 및 고온균 유래의 어떤 효소와도 그 염기서열이나 아미노산 서열에 있어서 상이하며 특히, 카르복실기 말단의 아미노산 서열 TSTISKQSEELTI을 특징적으로 갖고 있는 바, 이를 유전공학기술에 의해 대량 발현시켜, 의약품, 농약, 생리활성물질 등의 합성에 이용되는 D-아미노산의 제조에 효율적으로 사용한다.
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公开(公告)号：KR100253913B1
公开(公告)日：2000-04-15
申请号：KR1019970073899
申请日：1997-12-26
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C12N15/52
Abstract: PURPOSE: Provided is a gene of D-hydantoinase from Bacillus stearothermophilus SD-1 (KCTC 8551P) to manufacture proteins in a high yield. The D-hydantoinase is very useful in manufacturing D-amino acid used in drugs and agricultural chemicals etc. CONSTITUTION: A gene of D-hydantoinase is obtained by the following steps of: i) separating a gene that codes D-hydantoinase from Bacillus stearothermophilus SD-1 KCTC 8551P and cloning the gene with plasmid pBR32; ii) inserting a 3.1kb gene segment that codes D-hydantoinase into plasmid pUC18 to make recombinant plasmid pHBU183 and transforming E. coli with the plasmid to obtain fused protein; iii) to analyze the D-hydantoinase coding gene, cutting 3.1kb gene segment inserted into plasmid pHBU183 with restriction enzymes EcoRI and SacI, and linking new segments with plasmid pBluescript SK to make plasmid pHBMT183; iv) removing unnecessary DNA segments, cutting plasmid pHBMT183 with restriction enzyme EcoRI, and recovering DNA segments with Exonuclease III; v) linking recovered segments with pBluescript SK and inserting the plasmid into E. coli XL1-Blue for base analysis; vi) using the plasmid as a template to determine base sequences with primers T3 and T7.
Abstract translation: 目的：提供嗜热脂肪芽孢杆菌SD-1（KCTC 8551P）的D-乙内酰脲酶基因，高产量制备蛋白质。 D-乙内酰脲酶在制造用于药物和农药等的D-氨基酸中非常有用。构成：通过以下步骤获得D-乙内酰脲酶的基因：i）从嗜热脂肪芽孢杆菌中分离出编码D-乙内酰脲酶的基因 SD-1 KCTC 8551P，用质粒pBR32克隆该基因; ii）将编码D-乙内酰脲酶的3.1kb基因片段插入质粒pUC18以制备重组质粒pHBU183并用质粒转化大肠杆菌以获得融合蛋白; iii）分析D-乙内酰脲酶编码基因，用限制酶EcoRI和SacI切割插入质粒pHBU183的3.1kb基因片段，并将新片段与质粒pBluescript SK连接，制备质粒pHBMT183; iv）去除不必要的DNA片段，用限制酶EcoRI切割质粒pHBMT183，并用外切核酸酶III回收DNA片段; v）将回收的片段与pBluescript SK连接并将质粒插入大肠杆菌XL1-Blue进行碱基分析; vi）以质粒为模板，用引物T3和T7测定碱基序列。
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公开(公告)号：KR1019980084642A
公开(公告)日：1998-12-05
申请号：KR1019970020480
申请日：1997-05-23
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 암피실린(ampicillin)과 메티실린(methicillin)의 혼용에 의한 재조합 미생물의 안정적 배양방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 베타-락타마아제(β-lactamase) 발현 유전자를 선택표지로 가지면서, 배지에 첨가된 베타-락탐계열의 항생제를 선택력(selective pressure)으로 이용하는 재조합 미생물의 배양시, 배지에 베타-락탐 항생제와 베타-락타마아제의 저해제인 메티실린을 동시에 첨가하여 베타-락타마아제에 의한 암피실린의 분해를 방지함으로써, 재조합 미생물을 안정적으로 배양하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 재조합 미생물의 배양시, 배지에 첨가된 암피실린이 분해되지 않고 플라스미드를 함유하지 않은 세포들의 생장을 억제시키는 보다 강력한 선택력으로서 작용토록 함으로써, 재조합 미생물을 이용하여 실험실 규모에서부터 실제 산업적 규모까지 안정적이고도 높은 생산성으로 재조합 산물을 생산케 하는 효과적인 방법이다.
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