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公开(公告)号：KR100673811B1
公开(公告)日：2007-01-24
申请号：KR1020050039210
申请日：2005-05-11
Applicant: 한국표준과학연구원
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6869 , C12Q2523/125
Abstract: 본 발명은 유전자 내의 메틸 시토신의 정량 분석방법에 관한 것이다.
본 발명은 (1) 세포 또는 조직에서 추출한 게놈 DNA에 바이설파이트(bisulfite)를 반응시켜 메틸 시토신은 그대로 유지하고, 비메틸 시토신은 우라실(uracil)로 변형시키는 바이설파이트 처리 단계;
(2) 상기 (1) 단계에서 바이설파이트로 처리된 DNA를 주형(template)으로 하여 표적 유전자에 특이적으로 반응하는 프라이머와, dNTP 및 중합효소를 반응용액에 혼합하여 선별적으로 표적 유전자를 PCR 증폭하는 단계;
(3) 상기 (2) 단계의 증폭 산물에서 비특이적 증폭 산물, dNTP 및 프라이머를 제거하여 표적 유전자를 정제하는 단계;
(4) 상기 (3) 단계의 정제된 표적 유전자를 데옥시누클레오티드 일인산(dNMP)수준으로 분해하는 단계; 및
(5) 상기 (4) 단계의 분해된 dNMP 수준의 분해 산물을 모세관 전기영동 (capillary electrophoresis)을 이용하여 분리하고 이로부터 표적 유전자 내의 메틸 시토신 함량을 정량 및 측정하는 단계를 포함하여 이루어지는 유전자 내 메틸 시토신의 정량 분석방법 및 상기 기재의 메틸 시토신의 정량 분석방법을 사용하여 피검체의 시료의 메틸 시토신 함량을 측정하고 데이타베이스화된 노화, 암, 병원균, 조직의 메틸 시토신 함량과 비교하여, 피검체의 노화, 암, 병원균 구분, 병원균의 오염 유뮤, 조직의 구분 또는 개인 구분 및 진단하는 방법을 제공한다.
본 발명의 DNA 메틸화 정량 분석법은 지금까지 어떤 방법도 해결하지 못했던 고속, 고감도 및 자동화가 가능한 플랫폼으로 DNA 메틸화 정도를 정량할 수 있게 해 준다.
PCR, 바이설파이트, 모세관 전기영동, 메틸 시토신, 정량분석-
公开(公告)号：KR100666825B1
公开(公告)日：2007-01-11
申请号：KR1020050025267
申请日：2005-03-26
Applicant: 한국표준과학연구원
IPC: B01L3/02
CPC classification number: B01L3/50 , B01L2300/0838 , B01L2400/0418 , C12M35/02
Abstract: 본 발명은 전기전도성 막을 통해 전기회로가 완성되는 '전기삼투압류' (electro-osmotic flow) 발생장치에 시료주입 및 채취용 극미세 모세관을 유체역학적으로 결합하여, 전기삼투압류 발생장치에 가해지는 전류의 방향과 전압의 세기에 따라 극소량의 시료를 정교하게 주입 또는 추출해내는 장치 및 그의 제작방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 장치는 단일세포를 대상으로 극미량의 시료를 정교하게 채취 또는 주입하기 위해 고안된 것이나 극미량의 시료를 정교하게 다루어야하는 다른 모든 분야에도 적용될 수 있다. 극미세 모세관을 통해 유체의 흐름을 발생시키는데 따른 극한의 저항력 때문에 여러 문제가 발생하는 기존의 공기압 또는 기계적 펌프 방식에 비해, 전기삼투압류 형은 구동력이 모세관 내벽표면에서 발생하여 자체 내 유속저항이 없다. 또한 구동력이 조절이 정확하고 간편한 전압의 조절에 의해 이루어지므로 극소량의 유체의 흐름을 정교하게 통제할 수 있다. 본 발명에서는 전기전도성 관을 사용하여 전기삼투압류 발생용 모세관과 시료채취용 모세관을 직접 연결하는 방식을 고안함으로써 연결부위에서의 정체체적 (dead volume)이 최소화된 전기삼투압류 형 극미세 피펫 장치를 간편하게 제작, 활용할 수 있도록 하였다.
전기전도성 관, 전기삼투압류, 피펫-
公开(公告)号：KR1020060117437A
公开(公告)日：2006-11-17
申请号：KR1020050039210
申请日：2005-05-11
Applicant: 한국표준과학연구원
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6869 , C12Q1/6851 , C12Q2523/125 , C12Q2600/154
Abstract: A method for quantitative analysis of methyl cytosine in DNA and use thereof are provided to reduce the time for analysis, increase analysis sensitivity, simultaneously treat numerous samples, and improve analysis accuracy by bisulfite treating, PCR amplifying and performing capillary electrophoresis of genomic DNA. The method for quantitative analysis of methyl cytosine in DNA comprises the steps of: (1) reacting genomic DNA extracted from cells or tissues with bisulfite to modify non-methyl cytosine into uracil while methyl cytosine is maintained; (2) PCR amplifying the bisulfite-treated DNA with primers, dNTP and polymerase; (3) removing non-specific PCR products, dNTP and primers; (4) dissociating the target gene into deoxynucleotide monophosphate(dNMP) level; and (5) subjecting the dNMP level of dissociated products to capillary electrophoresis, and quantifying the methyl cytosine content in the target gene.
Abstract translation: 提供DNA中甲基胞嘧啶的定量分析方法及其应用，以减少分析时间，提高分析灵敏度，同时处理多种样品，并通过亚硫酸氢盐处理，PCR扩增和进行基因组DNA毛细管电泳提高分析准确性。 DNA的甲基胞嘧啶定量分析方法包括以下步骤：（1）将从细胞或组织提取的基因组DNA与亚硫酸氢盐反应，将非甲基胞嘧啶修饰成尿嘧啶，同时维持甲基胞嘧啶; （2）用引物，dNTP和聚合酶PCR扩增亚硫酸氢盐处理的DNA; （3）去除非特异性PCR产物，dNTP和引物; （4）将靶基因解离为脱氧核苷酸单磷酸（dNMP）水平; 和（5）使解离产物的dNMP水平进行毛细管电泳，并定量靶基因中的甲基胞嘧啶含量。
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公开(公告)号：KR1020060103390A
公开(公告)日：2006-09-29
申请号：KR1020050025267
申请日：2005-03-26
Applicant: 한국표준과학연구원
IPC: B01L3/02
CPC classification number: B01L3/50 , B01L2300/0838 , B01L2400/0418 , C12M35/02
Abstract: 본 발명은 전기전도성 막을 통해 전기회로가 완성되는 '전기삼투압류' (electro-osmotic flow) 발생장치에 시료주입 및 채취용 극미세 모세관을 유체역학적으로 결합하여, 전기삼투압류 발생장치에 가해지는 전류의 방향과 전압의 세기에 따라 극소량의 시료를 정교하게 주입 또는 추출해내는 장치 및 그의 제작방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 장치는 단일세포를 대상으로 극미량의 시료를 정교하게 채취 또는 주입하기 위해 고안된 것이나 극미량의 시료를 정교하게 다루어야하는 다른 모든 분야에도 적용될 수 있다. 극미세 모세관을 통해 유체의 흐름을 발생시키는데 따른 극한의 저항력 때문에 여러 문제가 발생하는 기존의 공기압 또는 기계적 펌프 방식에 비해, 전기삼투압류 형은 구동력이 모세관 내벽표면에서 발생하여 자체 내 유속저항이 없다. 또한 구동력이 조절이 정확하고 간편한 전압의 조절에 의해 이루어지므로 극소량의 유체의 흐름을 정교하게 통제할 수 있다. 본 발명에서는 전기전도성 관을 사용하여 전기삼투압류 발생용 모세관과 시료채취용 모세관을 직접 연결하는 방식을 고안함으로써 연결부위에서의 정체체적 (dead volume)이 최소화된 전기삼투압류 형 극미세 피펫 장치를 간편하게 제작, 활용할 수 있도록 하였다.
전기전도성 관, 전기삼투압류, 피펫
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