公开(公告)号：CN113430194B

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202011377672.6

申请日：2020-11-30

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曾凡锁 ,  高尚珠 ,  麻凯 ,  齐凤慧 ,  陈晓慧 ,  詹亚光

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法，以白桦中高度保守的BpPDS和BpUVR8为靶基因，在其保守结构域上分别选取了1个和4个靶位，共设计了5个靶序列，构造了pU3b‑sgRNA‑UBQ1‑Cas9转化载体。利用瞬时转染初步鉴定了5个靶序列与白桦基因组的适配度，稳定的农杆菌转化法被用于外源DNA的整合，初步说明BpPDS和BpUVR8‑1这两个靶位可以编辑白桦基因组；BpPDS与BpUVR8‑1稳定遗传转化的编辑效率分别为41.67％、100％，纯合单株的百分比分别为37.5％、100％。该方法的建立一方面，可用于初步鉴定载体的活性，筛选活性较大的靶位，提高转化效率；其次，可用于获得白桦CRISPR/Cas9突变体植株，方便生产规范化，对加快白桦功能基因的研究具有重要意义。

公开(公告)号：CN113430194A

公开(公告)日：2021-09-24

申请号：CN202011377672.6

申请日：2020-11-30

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曾凡锁 ,  高尚珠 ,  麻凯 ,  齐凤慧 ,  陈晓慧 ,  詹亚光

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法，以白桦中高度保守的BpPDS和BpUVR8为靶基因，在其保守结构域上分别选取了1个和4个靶位，共设计了5个靶序列，构造了pU3b‑sgRNA‑UBQ1‑Cas9转化载体。利用瞬时转染初步鉴定了5个靶序列与白桦基因组的适配度，初步说明BpPDS和BpUVR8‑1这两个靶位可以编辑白桦基因组；稳定的农杆菌转化法被用于外源DNA的整合，BpPDS与BpUVR8‑1稳定遗传转化的编辑效率分别为41.67％、100％，纯合单株的百分比分别为37.5％、100％。该方法的建立，一方面可用于初步鉴定载体的活性，筛选活性较大的靶位，提高编辑效率；另一方面可用于获取白桦CRISPR/Cas9突变体植株，缩短育种周期，为深入研究白桦基因功能及其基因资源的开发利用提供宝贵的材料基础。