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公开(公告)号：CN119351466B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411503015.X
申请日：2024-10-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/30 , A61K39/002 , A61P33/02
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种弓形虫基因敲除疫苗虫株的构建方法及其应用，通过基因编辑技术直接敲除弓形虫的TGGT1_202920基因得到ΔTGGT1_202920虫株，该虫株具有在体外能够正常培养、在体内几乎无毒的特性；对动物免疫接种ΔTGGT1_202920虫株后，可以产生良好的免疫保护力，能抵抗野生型弓形虫的感染，能用于制备抗弓形虫病疫苗，以预防弓形虫感染。
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公开(公告)号：CN118750592A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202411247790.3
申请日：2024-09-06
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种缺失TgAROM基因的弓形虫减毒疫苗，含有缺失了TgAROM基因的弓形虫疫苗虫株Δarom，所述TgAROM基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现直接敲除弓形虫TgAROM基因对弓形虫的胞内生长无明显影响；Δarom虫株可以在体外正常传代培养，但Δarom虫体在动物体内不繁殖，几乎没有毒力；免疫接种Δarom虫株可以产生良好的免疫保护力；综上表明Δarom虫株具有成为弓形虫疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN118546788A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410651467.6
申请日：2024-05-24
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酸脱氢酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用，该虫株(Δsdhα)通过基因编辑技术直接敲除弓形虫的TgSDHα得到；敲除TgSDHα后，显著影响弓形虫的生长，减缓虫体体外的增殖速度，并能降低弓形虫体内繁殖数量；Δsdhα虫株具有体外可以传代培养，体内几乎无毒力的特性，感染Δsdhα虫株的小鼠全部存活；对动物免疫接种Δsdhα虫株后可以产生良好的免疫保护力，能抵抗野生型弓形虫的感染。Δsdhα虫株能用于制备抗弓形虫病的疫苗，为防治弓形虫病提供安全、有效的疫苗候选。同时，TgSDHα可以作为弓形虫药物设计靶点，为防治弓形虫病提供更多有效药物靶标与基因资源。
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公开(公告)号：CN118146955A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410301081.2
申请日：2024-03-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种微小隐孢子虫23kDa黏蛋白CP23基因缺失虫株及其应用。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对微小隐孢子虫IIdA20G1亚型分离株的CP23基因进行敲除，获得了CP23基因缺失虫株；研究显示CP23缺失后影响微小隐孢子虫的体外入侵和生长发育，其基因缺失虫株可以在体外培养，在体外生的长荷虫量明显降低；通过体内免疫后，在小鼠体内其荷虫量也显著降低，排卵高峰期推迟并且排卵维持时间缩短，不会导致C57BL/6J小鼠在感染后死亡；采用CP23基因缺失虫株免疫后能减轻微小隐孢子虫对宿主的感染强度，具有毒力减弱的优点，能用于预防微小隐孢子虫感染，制备隐孢子虫减毒疫苗。
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公开(公告)号：CN116840473A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310581514.X
申请日：2023-05-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/535 , C07K16/20 , C07K16/06
Abstract: 本发明公开了一种检测微小隐孢子虫的双抗体夹心ELISA检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原，采用单克隆抗体制备技术，经过融合、克隆、筛选制备获得识别微小隐孢子虫胞内期所有阶段的单克隆抗体，作为检测抗体；利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原免疫新西兰兔，获得针对微小隐孢子虫的多克隆抗体，作为捕获抗体，并通过最佳稀释度的确定、封闭剂的选择、最佳孵育时间的确定等系列优化，建立了可用于临床样本中微小隐孢子虫的检测及鉴定的双抗体夹心ELISA检测方法及其试剂盒。该方法及试剂盒特异性较强，具有较好的灵敏度。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109735513B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN201811497728.4
申请日：2018-12-07
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。
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公开(公告)号：CN112724223B
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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公开(公告)号：CN113552335A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202010446599.7
申请日：2020-05-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/532 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N23/04 , G01N23/20
Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。
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公开(公告)号：CN111820185B
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202010712347.4
申请日：2020-07-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/02
Abstract: 本发明公开了一种IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁方法及其应用，所述扩繁方法为先将购买的IFN–γ基因缺陷杂合子交配，再将其子代中的纯合子和杂合子进行交配，再将子代中的雄性和雌性纯合子交配即可获得大量IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠，实现IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁，同时获得的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠较直接购买的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠体质正常，可更好用于隐孢子虫体外感染模型建立，极低剂量即可造成快速、慢性感染，且过程中小鼠死亡率低，可以满足隐孢子虫感染需要较长研究周期的要求。而且扩繁后获得的FN–γ基因缺陷纯合子小鼠可再直接纯纯交配产后代，实现大量扩繁，无需再经过复杂的纯杂交配。
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公开(公告)号：CN119351466A
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202411503015.X
申请日：2024-10-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/30 , A61K39/002 , A61P33/02
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种弓形虫基因敲除疫苗虫株的构建方法及其应用，通过基因编辑技术直接敲除弓形虫的TGGT1_202920基因得到ΔTGGT1_202920虫株，该虫株具有在体外能够正常培养、在体内几乎无毒的特性；对动物免疫接种ΔTGGT1_202920虫株后，可以产生良好的免疫保护力，能抵抗野生型弓形虫的感染，能用于制备抗弓形虫病疫苗，以预防弓形虫感染。
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