公开(公告)号：CN113552335B

公开(公告)日：2023-06-20

申请号：CN202010446599.7

申请日：2020-05-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  杨富娴 ,  黄吉雷 ,  冯耀宇 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/532 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N23/04 ,  G01N23/20

Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。

公开(公告)号：CN113552335A

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202010446599.7

申请日：2020-05-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  杨富娴 ,  黄吉雷 ,  冯耀宇 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/532 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N23/04 ,  G01N23/20

Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。

公开(公告)号：CN118191315A

公开(公告)日：2024-06-14

申请号：CN202410322139.1

申请日：2024-03-20

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  龚晓晴 ,  杨富娴 ,  冯耀宇 ,  肖立华 ,  郭亚琼 ,  许瑞 ,  孙晓华

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/68 ,  C07K16/20

Abstract: 本发明公开了CP2蛋白多克隆抗体作为隐孢子虫纳虫空泡膜定位标签抗体的应用。本发明通过对微小隐孢子虫的CP2蛋白进行原核表达，纯化蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，进行ELISA和WB检测抗体效价证明多抗有效，随后进行间接免疫荧光和免疫电镜检测抗体确定其定位于隐孢子虫纳虫空泡膜上，能特异性识别微小隐孢子虫CP2蛋白，即纳虫空泡膜，能作为标签定位隐孢子虫纳虫空泡，对于隐孢子虫未知蛋白的定位研究具有重要作用；通过免疫荧光定位还能对入侵细胞的隐孢子虫进行定位，并鉴定出更多与微小隐孢子虫入侵和发育相关的关键蛋白，用于抗隐孢子虫病的药物或疫苗的开发。