公开(公告)号：CN109943582A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910257075.0

申请日：2019-04-01

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  程莎莎 ,  高思远 ,  陆秋豪 ,  许晟 ,  王昕 ,  张阿磊 ,  杨赛 ,  李孟阳 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于多巴胺脱羧酶催化产多巴胺的方法，该方法具体包括以下步骤：构建表达多巴脱羧酶（DDC）的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-DDC；培养基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-DDC并诱导表达DDC；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，超声破碎，离心去除杂质，得DDC的粗酶液；以多巴为底物，加入0.1-1mM磷酸吡哆醛后调节反应体系的pH，加入DDC粗酶液反应得产物多巴胺。本发明方法是首次系统的做出从多巴到多巴胺的酶催化生产工艺，催化效率高达7.4g/l，转化率高达95％以上，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，具有很好的工业化生产前景。

公开(公告)号：CN112899297A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110254866.5

申请日：2021-03-09

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  程莎莎 ,  王昕 ,  冯娇 ,  许晟 ,  张阿磊 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于苯乙醇胺‑N‑甲基转移酶催化产辛弗林的方法，该方法具体包括以下步骤：生成表达苯乙醇胺‑N‑甲基转移酶的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑PNMT；培养基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑PNMT和诱导表达PNMT；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，匀浆破碎，离心消除杂质，得PNMT的粗酶液；以章鱼胺和S‑腺苷‑蛋氨酸为底物，加入PNMT粗酶液反应得产物辛弗林。本发明方法是首次系统的做出从章鱼胺到辛弗林的酶催化生产工艺，催化效率高达0.5g/l，转化率高达95％以上，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，具有很好的工业化生产前景。

公开(公告)号：CN111607624A

公开(公告)日：2020-09-01

申请号：CN202010581923.6

申请日：2020-06-23

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  程莎莎 ,  王昕 ,  冯娇 ,  高思远 ,  何雪峰 ,  王思源 ,  陆秋豪 ,  许晟 ,  张阿磊 ,  欧阳平凯

IPC: C12P13/00 ,  C12N15/70 ,  C12N9/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于苯乙醇胺-N-甲基转移酶催化产肾上腺素的方法，该方法具体包括以下步骤：生成表达苯乙醇胺-N-甲基转移酶（PNMT）的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-PNMT；培养基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-PNMT和诱导表达PNMT；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，匀浆破碎，离心消除杂质，得PNMT的粗酶液；以去甲肾上腺素和S-腺苷-蛋氨酸（SAM）为底物，加入PNMT粗酶液反应得产物肾上腺素。本发明方法是首次系统的做出从去甲肾上腺素到肾上腺素的酶催化生产工艺，催化效率高达2g/l，转化率高达95％以上，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，具有很好的工业化生产前景。

公开(公告)号：CN112899298A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110255680.1

申请日：2021-03-09

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈可泉 ,  程莎莎 ,  王昕 ,  乔荣梅 ,  胡鑫峰 ,  冯娇 ,  张阿磊 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12P13/00

Abstract: 本发明公开了一种基于酪胺‑β‑羟化酶催化产章鱼胺的方法，该方法具体包括以下步骤：生成表达酪胺‑β‑羟化酶的基因工程菌BL21(DE3)/pET28a‑TBH；培养基因工程菌BL21(DE3)/pET28a‑TBH和诱导表达TBH；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，匀浆破碎，离心消除杂质，得TBH的粗酶液；以酪胺为底物，加入抗坏血酸、富马酸、铜离子为辅因子，加入TBH粗酶液反应得产物章鱼胺(在有氧条件下进行)。本发明方法是首次系统的做出从酪胺到章鱼胺的酶催化生产工艺，催化效率高达20mg/L，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，成功打通了这条路径，为以后的章鱼胺生产研究奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN112877321A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110163351.4

申请日：2021-02-05

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王昕 ,  马琛 ,  郭元柯 ,  陈可泉 ,  高思远 ,  程莎莎 ,  金雨琪 ,  欧阳平凯

IPC: C12N11/14 ,  C12N9/88 ,  C12P13/00

Abstract: 本发明公开了一种制备石墨烯固定化酶的方法及其应用，本发明运用共价结合法固定多巴脱羧酶技术，通过采用高比表面积的氧化石墨烯作为载体，对氧化石墨烯表面进行修饰，在载体表面引入能够与酶发生特异性共价反应的功能基团，并在温和条件下与酶进行键合固定；通过协同催化效应，提高酶的稳定性和重复利用率。此制备技术可以应用于酶脱羧领域，环保无污染，后处理简单，转化率高，可重复利用，尤其适于脱羧酶的固定。