公开(公告)号：CN110396509B

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN201910670475.4

申请日：2019-07-24

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  申玉姣 ,  熊伟 ,  凌雪萍 ,  卢英华

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/11 ,  H01M8/16

Abstract: 本发明提供了一种改变葡萄糖脱氢酶的辅酶活性和偏好性的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明所述方法通过对葡萄糖脱氢酶保守序列GXXXGXG第四位氨基酸进行定点突变，无需通过大量筛选就可以简单直接获得改变辅酶活性和偏好性的突变蛋白，可以广泛应用酶催化辅酶再生反应。在本发明实施例中，通过对不同来源的葡萄糖脱氢酶中广泛存在的保守序列GXXXGXG中与烟酰胺辅酶核糖2’‑磷酸结合的第4位氨基酸进行定点突变，最终得到四种葡萄糖脱氢酶突变体T17G、T17K、T17R以及K17G，且经过验证，其酶活以及偏好性等都发生了变化。

公开(公告)号：CN110396509A

公开(公告)日：2019-11-01

申请号：CN201910670475.4

申请日：2019-07-24

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  申玉姣 ,  熊伟 ,  凌雪萍 ,  卢英华

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/11 ,  H01M8/16

Abstract: 本发明提供了一种改变葡萄糖脱氢酶的辅酶活性和偏好性的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明所述方法通过对葡萄糖脱氢酶保守序列GXXXGXG第四位氨基酸进行定点突变，无需通过大量筛选就可以简单直接获得改变辅酶活性和偏好性的突变蛋白，可以广泛应用酶催化辅酶再生反应。在本发明实施例中，通过对不同来源的葡萄糖脱氢酶中广泛存在的保守序列GXXXGXG中与烟酰胺辅酶核糖2’-磷酸结合的第4位氨基酸进行定点突变，最终得到四种葡萄糖脱氢酶突变体T17G、T17K、T17R以及K17G，且经过验证，其酶活以及偏好性等都发生了变化。

公开(公告)号：CN112725232B

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202110002344.6

申请日：2021-01-04

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  徐思明 ,  熊伟 ,  杨童童

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于藻类培养技术领域，具体涉及一种培养高含量藻蓝蛋白的螺旋藻的培养基和方法。本发明提供了一种培养高含量藻蓝蛋白的螺旋藻的培养基包括螺旋藻基础培养基和还原氧化石墨烯‑二氧化钛复合材料。在本发明中，所述培养基中的还原氧化石墨烯‑二氧化钛复合材料进入螺旋藻细胞内会发生团聚或是与螺旋藻细胞结合，通过遮光效应和氧化应激效应提高螺旋藻细胞中藻蓝蛋白的含量。

公开(公告)号：CN112725232A

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN202110002344.6

申请日：2021-01-04

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  徐思明 ,  熊伟 ,  杨童童

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于藻类培养技术领域，具体涉及一种培养高含量藻蓝蛋白的螺旋藻的培养基和方法。本发明提供了一种培养高含量藻蓝蛋白的螺旋藻的培养基包括螺旋藻基础培养基和还原氧化石墨烯‑二氧化钛复合材料。在本发明中，所述培养基中的还原氧化石墨烯‑二氧化钛复合材料进入螺旋藻细胞内会发生团聚或是与螺旋藻细胞结合，通过遮光效应和氧化应激效应提高螺旋藻细胞中藻蓝蛋白的含量。

公开(公告)号：CN111849933A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010800001.X

申请日：2020-08-11

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  熊伟 ,  申玉姣 ,  卢英华

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明所述突变体是由野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列突变而来，所述野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列第89位的赖氨酸饱和突变为NNN或第122位的丙氨酸定点突变为甘氨酸，所述野生型亮氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验结果表明：K89T亮氨酸脱氢酶对Asn和Thr表现出一定活性，A122G亮氨酸脱氢酶对Phe、His、Met表现一定活性，而野生型亮氨酸脱氢酶对这些氨基酸完全无活性；并且，K89T亮氨酸脱氢酶对于Asp氧化脱氨反应的酶活是野生型亮氨酸脱氢酶的2倍。

公开(公告)号：CN111849933B

公开(公告)日：2022-01-14

申请号：CN202010800001.X

申请日：2020-08-11

Applicant: 厦门大学

Inventor： 敬科举 ,  熊伟 ,  申玉姣 ,  卢英华

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明所述突变体是由野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列突变而来，所述野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列第89位的赖氨酸饱和突变为NNN或第122位的丙氨酸定点突变为甘氨酸，所述野生型亮氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验结果表明：K89T亮氨酸脱氢酶对Asn和Thr表现出一定活性，A122G亮氨酸脱氢酶对Phe、His、Met表现一定活性，而野生型亮氨酸脱氢酶对这些氨基酸完全无活性；并且，K89T亮氨酸脱氢酶对于Asp氧化脱氨反应的酶活是野生型亮氨酸脱氢酶的2倍。