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公开(公告)号：CN119639746A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202411891326.8
申请日：2024-12-20
Applicant: 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒的快速可视化检测方法，属于分子生物学诊断技术领域。本发明将核酸免提取技术、等温扩增技术与CRISPR/Cas系统相结合，开发出一种适用于ASFV的快速、灵敏、现场即时检测方法。该方法首先利用等温扩增(RAA)技术对目标序列进行扩增，再结合CRISPR‑Cas13d系统进行特异性识别和信号放大，该方法兼具高灵敏度和高特异性。此外，本发明引入了核酸快速提取方法和多元化结果展示技术，以简化检测流程，提高检测效率，克服了当前商品化核酸提取试剂盒步骤复杂的问题，进一步推动其在现场即时检测中的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118581277A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410785519.9
申请日：2024-06-18
Applicant: 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d技术检测猪圆环病毒2型的方法，属于分子生物学诊断技术领域。该方法能够成功检测出临床阳性PCV2样本，并且通过结合使用RNA荧光报告分子，可以实现对PCV2的现场可视化检测，检测过程仅需使用蓝光透射仪进行照射，通过观察反应体系中扩增产物是否呈现荧光，即可判定检测结果。此外，该试剂盒也支持使用qPCR仪器进行定量检测，从而在1小时内快速判定结果。本发明不仅减少了诊断成本和时间，并且结果可视化，对于提高生猪养殖业中PCV2水平的检测能力、降低养殖场的生物安全风险将具有重要意义。
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公开(公告)号：CN119220742A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411591641.9
申请日：2024-11-08
Applicant: 四川农业大学 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d体系检测PRRSV‑1的方法，属于分子生物学诊断技术领域。该方法能够有效检测临床阳性PRRSV‑1样本，并且可以通过结合RNA荧光报告分子，实现PRRSV‑1的现场可视化检测，检测过程中仅需使用蓝光透射仪照射，通过观察反应体系中是否产生荧光信号，即可判断检测结果。此外，该方法也支持使用qPCR仪器进行定量检测，在1小时内便可以快速判定结果。本发明不仅降低了诊断成本和时间，并且通过结果的可视化检测，提高了生猪养殖业中PRRSV‑1的检测能力，减少了养殖场的生物安全风险。
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公开(公告)号：CN118460682A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410936935.4
申请日：2024-07-12
Applicant: 畜科生物工程有限公司 , 四川农业大学 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/70 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/19 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种基于RAA和CRISPR‑Cas13d的PEDV检测方法、试剂盒及其应用，属于分子生物学诊断技术领域；本发明使用RAA引物和标准阳性质粒PMD‑19T‑PEDV M作为模板进行RAA扩增，扩增产物经过纯化后用于T7体外转录，将DNA模板转录成靶标ssRNA；将转录的ssRNA与Cas13d蛋白、crRNA和荧光RNA报告探针进行反应进行荧光信号检测。本发明将以RT‑RAA技术和CRISPR‑Cas13d技术结合，实现对PEDV临床样本的高灵敏度、低复杂性的可视化检测，具有操作简单、检测灵敏、结果可视化的优点，从而为提高生猪养殖行业检测PEDV，降低生物安全风险提供技术手段。通过体外合成用于扩增的标准阳性质粒pMD‑19T‑PEDV和RAA的引物，原核表达CRISPR/Cas13d蛋白、体外转录CrRNA，其应用于猪流行性腹泻病毒的检测。
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公开(公告)号：CN118272583A
公开(公告)日：2024-07-02
申请号：CN202410581336.5
申请日：2024-05-11
Applicant: 四川农业大学 , 畜科生物工程有限公司 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种检测或辅助检测猪伪狂犬病毒的方法。该方法包括如下步骤：以待测样本的总DNA为模板，以SEQ ID NO:7所示的上游引物和SEQ ID NO:10所示的下游引物组成的RAA引物对进行RAA扩增，得到RAA扩增产物；对RAA扩增产物进行T7体外转录，得到转录产物；采用EQ ID NO:2所示的crRNA‑2、ssRNA荧光报告分子UUUUUU和EsCas13a蛋白对转录产物进行CRISPR切割，得到切割反应产物；通过检测切割反应产物的荧光判定待测样本是否含有猪伪狂犬病毒。本发明所提供的RAA引物对和crRNA‑2可以检测猪伪狂犬病毒。本发明具有重要的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117304337A
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202311171710.6
申请日：2023-09-12
Applicant: 四川农业大学 , 畜科生物工程有限公司 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , A61K39/125 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种A型塞内卡病毒VP1抗原及其应用。本发明属于生物技术领域，具体涉及一种A型塞内卡病毒VP1抗原及其应用。本发明提供的融合蛋白，为将荧光蛋白融合于塞内卡病毒VP1抗原的N端得到的蛋白质，融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.6。通过海肾荧光素酶标记塞内卡病毒VP1抗原，来捕获特异性抗体的新型荧光素酶免疫吸附试验方法，检测动态范围更广，无需连续稀释样本就可实现半定量检测，提高试验结果的准确性，为SVA血清学流行趋势提供技术支持。
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公开(公告)号：CN119824147A
公开(公告)日：2025-04-15
申请号：CN202510261769.7
申请日：2025-03-06
Applicant: 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d的塞内卡谷病毒的可视化检测方法，属于分子生物学诊断技术领域。该方法首先利用等温扩增技术RAA对目标病毒序列进行扩增，其使用的扩增引物序列如SEQ ID NO.3、6所示，再利用CRISPR‑Cas13d系统进行特异性识别和信号放大，其使用的crRNA序列如SEQ ID NO.13所示，最后利用多种可视化方法对检测结果进行可视化观察。本发明提供上述检测方法能够对SVA病毒进行精准、快速的现场及时检测，显著提升了SVA型病毒的检测能力，减少了生物安全风险。
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公开(公告)号：CN118497422B
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202410715620.7
申请日：2024-06-04
Applicant: 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d体系检测猪乙脑病毒的方法，属于分子生物学诊断技术领域。本发明的方法可以成功检测出临床阳性JEV样本，结合RNA荧光报告分子可对JEV进行现场可视化检测，只使用蓝光透射仪进行照射，观察反应体系扩增产物是否呈现荧光即可判定检测结果，或者使用qPCR仪对其进行定量检测，1h以内即可判定结果。本发明的引物和crRNA特异性强、敏感性好，且操作简单、检测快速、结果可视化，使得本发明建立的基于RAA和CRISPR‑Cas13d技术的检测JEV的方法可以用于JEV的现场可视化检测，从而为提高生猪养殖行业检测JEV水平，降低养殖场生物安全风险提供技术手段。
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公开(公告)号：CN118497422A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410715620.7
申请日：2024-06-04
Applicant: 四川农业大学 , 成都市畜禽遗传资源保护中心 , 生猪技术创新中心(重庆)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13d体系检测猪乙脑病毒的方法，属于分子生物学诊断技术领域。本发明的方法可以成功检测出临床阳性JEV样本，结合RNA荧光报告分子可对JEV进行现场可视化检测，只使用蓝光透射仪进行照射，观察反应体系扩增产物是否呈现荧光即可判定检测结果，或者使用qPCR仪对其进行定量检测，1h以内即可判定结果。本发明的引物和crRNA特异性强、敏感性好，且操作简单、检测快速、结果可视化，使得本发明建立的基于RAA和CRISPR‑Cas13d技术的检测JEV的方法可以用于JEV的现场可视化检测，从而为提高生猪养殖行业检测JEV水平，降低养殖场生物安全风险提供技术手段。
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公开(公告)号：CN119139393A
公开(公告)日：2024-12-17
申请号：CN202411376850.1
申请日：2024-09-30
Applicant: 四川农业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于防治兔腹泻的中药组合物及其制备方法和应用，由下述原料药制备而成：侧柏叶、橘叶、蒲公英。本发明仅通过三味中药组成的中药小复方即可实现预防和治疗兔腹泻，疗效更加明确，无副作用，安全性高。本发明通过原材料筛选、制备过程优化、提高有效成分稳定性等有效手段，提高组合物中黄酮类、多糖类和有机酸等有效成分的含量及其稳定性，有效预防和治疗兔腹泻尤其是细菌性腹泻。
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