公开(公告)号：CN101974549A

公开(公告)日：2011-02-16

申请号：CN201010270483.9

申请日：2010-09-02

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 甘德芳 ,  程备久 ,  朱苏文 ,  张姣 ,  赵阳 ,  程郢

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/113 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种玉米兼抗矮花叶病毒及粗缩病毒无选择标记siRNA复合表达载体及其构建方法。RT-PCR分别扩增玉米矮花叶病毒及粗缩病毒外壳蛋白基因特异性片段，构建反向重复表达载体，利用中间载体分别将玉米矮花叶病毒外壳蛋白及粗缩病毒外壳蛋白两个反向重复片段串联在一起；将含双T的真核表达载体酶切，连入Ubiquitin启动子及Nos终止子，再将串联重复片段连入载体中，构建成兼抗玉米矮花叶病毒及粗缩病毒的无选择标记siRNA复合表达载体。本发明能够在转化后代中通过自交分离获得剔除选择标记的双抗性植株。本发明对开展抗病毒RNA干扰调控技术研究，创建高抗病毒玉米新种质具有重要的理论和实践意义。

公开(公告)号：CN101974526A

公开(公告)日：2011-02-16

申请号：CN201010270473.5

申请日：2010-09-02

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 程备久 ,  甘德芳 ,  朱苏文 ,  马庆 ,  张姣 ,  赵阳 ,  程郢

IPC: C12N15/113 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明是一种生物技术领域的利用RNA干涉技术，玉米体外应用dsRNA抗MDMV干扰调控技术。利用RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒CP基因两个特异性片段，构建反向重复表达载体LMCP1及LMCP2，利用IPTG诱导表达，在大肠杆菌HT115(DE3)中生产抗MDMV的dsRNA，将提取的dsRNA稀释，稀释浓度大于1/15后喷洒三叶期的玉米叶片。本发明对开展抗病毒RNA干扰调控技术研究，建立玉米体外应用dsRNA诱导抗病毒非转基因RNA干扰调控技术体系和筛选出高效dsRNA干扰制剂具有重要理论和指导意义，可为玉米病毒病防治提供一种简单、有效和廉价的新方法，也可为其它植物病毒病防治提供借鉴。