一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN111607594B

    公开(公告)日:2023-10-20

    申请号:CN202010338637.7

    申请日:2020-04-26

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法,该细胞系采用以下步骤制备:(1)靶位点设计及sgRNA序列的合成:根据猪IRF8基因CDS区5’端设计sgRNA向导序列;(2)载体构建:将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA;将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体;(3)细胞转染:将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC‑J2获得IRF8基因敲除的IPEC‑J2细胞。建立IRF8基因敲除的小肠上皮细胞系,可为深入揭示腹泻病原体致病机制、抗性基因挖掘与鉴定以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。

    一种与仔猪细菌性腹泻抗性相关的lncRNA标志物及其应用

    公开(公告)号:CN113832235A

    公开(公告)日:2021-12-24

    申请号:CN202111035954.2

    申请日:2021-09-06

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明通过组学测序筛选出1个大肠杆菌F18感染调控的关键候选lncRNA‑FUT3‑AS1,序列为SEQ ID NO:1,在此基础上,本研究围绕FUT3‑AS1功能与调控机制开展深入分析,首先利用qPCR和Northern blot技术检测了FUT3‑AS1在梅山猪与苏太猪F18大肠杆菌敏感型与抗性型断奶仔猪十二指肠中的表达差异情况,成功建立lncRNA‑FUT3‑AS1沉默的猪小肠上皮细胞,干扰效率达到68%,且通过细菌计数、革兰氏染色、扫描电镜以及间接免疫荧光等一系列检测手段发现,沉默lncRNA‑FUT3‑AS1可以显著地降低F18大肠杆菌对IPEC‑J2细胞的黏附能力。由此表明,lncRNA‑FUT3‑AS1在断奶仔猪抵抗F18大肠杆菌侵染过程中发挥了重要的抗性调控功能,其表达水平下调降低了小肠上皮细胞对F18大肠杆菌的黏附能力,有助于提高仔猪对F18大肠杆菌侵染的抵抗能力。

    一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN111607594A

    公开(公告)日:2020-09-01

    申请号:CN202010338637.7

    申请日:2020-04-26

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除猪IRF8基因的细胞系及其构建方法,该细胞系采用以下步骤制备:(1)靶位点设计及sgRNA序列的合成:根据猪IRF8基因CDS区5’端设计sgRNA向导序列;(2)载体构建:将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA;将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体;(3)细胞转染:将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC-J2获得IRF8基因敲除的IPEC-J2细胞。建立IRF8基因敲除的小肠上皮细胞系,可为深入揭示腹泻病原体致病机制、抗性基因挖掘与鉴定以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。

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