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公开(公告)号：CN114350660A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111458760.3
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Lux群体感应元件的枯草芽孢杆菌自诱导基因表达系统，属于基因工程技术领域。本发明将来源于V.fischeri的lux群体感应系统重新设计，并在野生型PluxI启动子的基础之上对其‑10区上游4bp进行随机建库获得了活性提升的突变体启动子P22，P47，P56和P58，并以sfGFP作为报告基因来检测所述系统表达外源蛋白的水平，将sfGFP置于PluxI，P22，P47，P56和P58启动子下游，结果显示突变后的启动子较野生型PluxI有了明显的提升。本发明提供的这种系统可高效表达外源蛋白，从而在外源蛋白高效表达和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114350645A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111457993.1
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新基因型腈水合酶及其重组表达，属于生物工程技术领域。所述腈水合酶来源于RoseomonasStagni，基因全长1014bp，编码336个氨基酸，并将其成功构建于大肠杆菌重组表达体系中。得到的目的蛋白以3‑氰基嘧啶为催化底物，可证明其是一种新型的腈水合酶，对烟腈有催化活力。并且将所述腈水合酶第250位精氨酸突变为丙氨酸后酶活提高了3.61倍，更加适于酰胺类物质在工业领域的生产。
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公开(公告)号：CN114250217A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111478385.9
申请日：2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种理性设计提升腈水解酶活性的方法及应用，属于酶工程领域。本发明通过腈水解酶的晶体结构进行分析，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，对每个点做饱和突变后，通过两种计算方法Rosetta‑Cartesian和FEP对获得的突变体进行稳定性和结合自由能分析，对满足要求的突变体做酶活测定。将单点突变酶活高于野生型的位点进行组合突变再进行计算，最终获得符合要求的突变体进行酶活测定。通过这种方法我们最后获得了两个单点突变体，比酶活为野生型的2、1.5倍，组合突变体F64YW170G比酶活为野生型的4.56倍。
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公开(公告)号：CN114107269A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111395709.2
申请日：2021-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。
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公开(公告)号：CN111607623B
公开(公告)日：2022-02-11
申请号：CN202010479232.5
申请日：2020-05-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌制备α‑酮异戊酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种偶联表达乙酰乳酸合成酶、乙酰乳酸异构还原酶和二羟基酸脱水酶的重组菌株，并对该宿主菌株进行改造优化，获得能够发酵法高效生产α‑酮异戊酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成附加值更高的α‑酮异戊酸，发酵36h，α‑酮异戊酸产量可达22.91g/L，葡萄糖转化率达80％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113583925A
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202110441638.9
申请日：2021-04-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程大肠杆菌发酵制备广藿香醇的方法，属于生物工程领域。本发明改造广藿香醇合酶及宿主菌株，获得能够高效发酵生产广藿香醇的重组菌及其发酵方法。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成高附加值的广藿香醇，摇瓶发酵96h广藿香醇产量达到338.6mg/L，得率为48.6mg/g干2细胞重量，体积生产强度为84.6mg/L/d。在5L发酵罐中，广藿香醇产量可达到970.1mg/L，体积生产强度为199mg/L/d。
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公开(公告)号：CN113061538A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110308872.4
申请日：2021-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构巢曲霉自诱导型表达系统及其应用，属于基因工程领域。本发明所述的表达系统时基于硝酸盐还原酶启动子受硝酸盐诱导铵盐抑制的特性。在此基础上表征了其自诱导的特征。各实验结果充分说明基于硝酸盐还原酶启动子的自诱导构巢曲霉表达系统能够进行自诱导表达，丰富了构巢曲霉的表达系统形式，培养方式操作简单，在构建蛋白表达系统方面有巨大的应用空间。
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公开(公告)号：CN109852650B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201811547731.2
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12N9/24 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种由茶碱调控的人工适体酶及应用，属于基因工程技术领域。本发明采用茶碱适体域融合核酶的方式，得到了一种可调控外源蛋白表达的调控元件。该调控元件PAZSDE1‑BG8可以在枯草芽孢杆菌中调控外源基因的表达。当以绿色荧光蛋白基因为目的基因时，可以使荧光强度提高7.23倍；当以普鲁兰酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使普鲁兰酶的酶活从0.30886U/mL提高到6.07431U/mL。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN111662906A
公开(公告)日：2020-09-15
申请号：CN202010606719.5
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对单终止子的活性进行表征，通过不同活性的终止子进行组合串联的方式，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111269926A
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN201911414867.0
申请日：2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种钴离子诱导型蛋白表达系统及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将响应钴离子的阻遏蛋白RcnR及其操纵序列rcnO与来源于枯草芽孢杆菌的强启动子Pveg构建在一起，得到了钴离子诱导型高效基因表达系统。当利用该系统表达腈水合酶时，以500μM钴离子作为诱导剂，酶活最高达到106.2±4.6U/mL，接近使用IPTG诱导系统的水平(121.4±4.0U/mL)。在利用该钴离子诱导型系统表达腈水合酶过程中，钴离子同时作为腈水合酶的诱导剂和金属配体，不需要额外添加化学诱导剂，降低了生产成本，简化了生产工艺。
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