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公开(公告)号：CN109880783A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910318050.7
申请日：2019-04-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/56 , C12N9/44 , C12N15/70 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P7/48 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种嗜热重组II型普鲁兰酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中异源表达II型普鲁兰酶，获得一种嗜热重组II型普鲁兰酶，其最适pH为6.6，在pH 5.8-8.0条件下有较好的pH耐受性，最适温度为95℃，在95℃保温10h，剩余酶活大于50％，能够在强还原条件下展现出较高的比酶活，如在培养环境中加入DTT，能使Sumo-PulPy比酶活提升237.2％。本发明还提供了II型普鲁兰酶Sumo-PulPy的组合截断突变体△28N+△791C，该酶突变体的比酶活为32.18±0.92U/mg，是野生酶的5.99倍，具有重要的工业应用价值和潜力。
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公开(公告)号：CN109486847A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109456928A
公开(公告)日：2019-03-12
申请号：CN201811523481.9
申请日：2018-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株表达L-天冬氨酸-β-脱羧酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高酶活的L-天冬氨酸β-脱羧酶菌株，将重组菌株摇瓶发酵，以L-Asp-Na作为底物，进行全细胞催化反应制备L-丙氨酸。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，催化效率高，终产物L-丙氨酸产率94％以上，简化产物的分离纯化步骤。
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公开(公告)号：CN109355276A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811426687.X
申请日：2018-11-27
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2457 , C12N15/70 , C12P19/04 , C12P19/14 , C12Y302/01041
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了一种普鲁兰酶突变体，得到的单突变体K419R(第419位赖氨酸突变为精氨酸)的酶活是野生型的1.3，67℃保温30min剩余酶活达67.3U/mg；迭代突变体K419R+Y102C+K383C(第419位赖氨酸突变为精氨酸，第102位酪氨酸和第383位赖氨酸分别突变为半胱氨酸)的酶活提高为野生型的2倍，在67℃保温30min剩余酶活达88.3U/mg，为保温前的43.1％，具有较好的热稳定性。本发明的普鲁兰酶突变体能够应用于淀粉糖化过程。
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公开(公告)号：CN109251882A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811438328.6
申请日：2018-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株异源表达耐热腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高腈水合酶酶活的大肠杆菌重组菌株，发酵得到的重组腈水合酶具有更好的热稳定性。另外，可以此大肠杆菌重组菌株为催化剂，以烟腈或丙烯腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺或丙烯酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，简化了产物的分离纯化步骤，催化效率高，终产物烟酰胺或丙烯酰胺产率95％以上。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109251881A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811284566.6
申请日：2018-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株异源表达腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高腈水合酶酶活的大肠杆菌重组菌株，将重组菌株高密度发酵，以烟腈或丙烯腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺或丙烯酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，简化了产物的分离纯化步骤，催化效率高，终产物烟酰胺或丙烯酰胺产率95％以上。
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公开(公告)号：CN107937372A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201711376850.1
申请日：2017-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种耐酸性提高的纳豆激酶，属于蛋白质工程。本发明得到的纳豆激酶Q59E-Y217K-N218D和Y217K，在酸性条件下，Q59E-Y217K-N218D和Y217K的稳定性较野生酶有大幅度提高。本发明提供的纳豆激酶突变体Q59E-Y217K-N218D和Y217K能更好的应对胃道极端酸性环境，提高了纳豆激酶作为治疗心脑血管疾病口服药物的应用价值。
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公开(公告)号：CN107828673A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711375210.9
申请日：2017-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y的方法，属于生物工程领域。本发明通过构建表达重组质粒pPICZα-procpy，电转化毕赤酵母GS115，通过不断提高抗生素的方法，筛选得到具有不同拷贝数的表达重组菌株，再往得到的重组菌株中转入来源于毕赤酵母的伴侣蛋白BIP，最终得到一株高效表达来源雅致放射毛霉的羧肽酶Y的表达重组菌株，诱导表达6天之后，表达量达到了525±20mg/L。
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公开(公告)号：CN106916819A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201710290938.5
申请日：2017-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种活性提高的枯草芽孢杆菌启动子及其构建与应用，属于启动子工程领域。本发明方法以PsrfA启动子为模板进行定向进化，筛选得到了活性大幅提高的突变体启动子，以绿色荧光蛋白GFP为报告基因，突变后的启动子的最高表达量较原始启动子提高了70％。随后又进行了天冬氨酸酶AspA的表达，其突变体表达量较原始相比，分别提高了90％。此法与利用流式细胞仪建库相比，极大减少工作量而且有效，与此同时将此策略运用于其他启动子改造，改造后的启动子表达目的基因的能力也有很大提高。
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公开(公告)号：CN106755016A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611094281.7
申请日：2016-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种雅致放射毛霉羧肽酶Y基因及其应用，属于生物技术领域。本发明所述的羧肽酶Y基因全长是通过提取雅致放射毛霉的RNA，反转录获得cDNA后，通过末端扩增技术(RACE)获得的，该基因全长1557bp，编码518个氨基酸。本发明为首次从雅致放射毛霉菌PEP001(A.elegans PEP001)中成功克隆出CPY基因全长，并将其编码基因在GS115中进行重组表达。酶原经过体外激活、纯化，测定了成熟CPY的基本酶学性质，为对其进行更深入的研究提供前提条件。
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