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公开(公告)号：CN101580541A
公开(公告)日：2009-11-18
申请号：CN200910071261.1
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种传染性胰腺坏死重组VP2蛋白抗原及纯化方法。从传染性胰腺坏病毒细胞培养液中进行病毒核酸(RNA)提取，以IPNV VP2基因的下游引物P2进行病毒基因组cDNA的合成，再利用IPNV VP2基因的上、下游引物，进行VP2基因的扩增，将扩增得到的IPNV VP2基因克隆到原核表达载体质粒pET30b中，并在大肠杆菌BL21菌株中进行表达得到传染性胰腺坏死重组VP2蛋白抗原。该抗原可以克服传染性胰腺坏死传统诊断方法中的抗原所存在的排毒、散毒的潜在危险，可作为一种疾病监测的诊断抗原。
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公开(公告)号：CN114874998A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210810758.6
申请日：2022-07-11
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一种鲤浮肿病毒体外分离培养方法，属于兽用生物制品技术领域，解决了目前鲤浮肿病毒不能体外培养的问题。本发明采用未感染任何病原体的健康松浦镜鲤幼鱼的头肾组织进行酶解处理，对其进行原代细胞培养，将过滤除菌的鲤浮肿病毒阳性的鳃组织匀浆液接种于鲤头肾原代细胞上，对培养后的病毒进行PCR鉴定；测序结果比对，与已公布的鲤浮肿病毒核苷酸序列同源性均为98%以上，说明鲤浮肿病毒能够在鲤头肾原代细胞上分离培养并稳定增殖。本发明的方法实现了鲤浮肿病毒体外细胞传代培养，对该病毒的基础生物学特性研究及疫苗的研发奠定了基础，本发明的方法的实验材料获取广泛，易于实验室操作，能够适用于鲤浮肿病毒体外培养及增殖。
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公开(公告)号：CN106190986B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610533234.1
申请日：2016-07-07
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗蓝舌病病毒血清4型VP2蛋白的单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及用途。本发明以pET‑28a为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为免疫原免疫小鼠，以pMAL‑c5x为载体构建表达的VP2‑4B蛋白作为抗原，筛选阳性杂交瘤细胞，最终筛选得到一株能够稳定分泌抗BTV4‑VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，实验证明，该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6能够与BTV4‑VP2蛋白发生特异性反应，而与其他血清型VP2蛋白不发生反应。本发明的单克隆抗体BTV4‑VP2‑1B6为建立BTV4与其他血清型的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107179408B
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201710318544.6
申请日：2017-05-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN104911152B
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ‑09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ‑09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ‑09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ‑09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ‑09反向遗传系统，将rIHNV HLJ‑09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV‑EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV‑EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ‑09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107271667A
公开(公告)日：2017-10-20
申请号：CN201710415171.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/577
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/558 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株8B3G11分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株8B5D4分泌产生。本发明利用制备的两株8型BTV VP2单克隆抗体8B5D4以及8B3G11建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN107179408A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710318544.6
申请日：2017-05-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68
CPC classification number: G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。
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公开(公告)号：CN106676201A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710093483.8
申请日：2017-02-21
Applicant: 东北农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6851 , C12Q2563/107 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明公开了一种检测鲑鱼甲病毒的引物对、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR试剂盒及其应用。本发明首先提供了用于检测鲑鱼甲病毒的实时荧光定量PCR引物对，其序列分别如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示。本发明还提供了含有上述引物对的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR试剂盒及其检测鲑鱼甲病毒的方法。研究表明，使用本发明的引物或试剂盒检测鲑鱼甲病毒，具有简便、快速、准确、灵敏度高、特异性好等优点，可用于鲑鱼甲病毒六个基因型的检测，本发明的提出为鲑鱼甲病毒的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN103689247A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310594969.1
申请日：2013-11-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一种作为断乳仔猪饲料添加剂的表达乳铁蛋白重组乳酸菌组合物，其特征在于，所述组合物将戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus KLDS1.0413）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum KLDS1.0344）作为口服活载体，其中，戊糖乳杆菌和植物乳杆菌中均含有连接有PLF基因的穿梭表达载体pPG612.1。本发明可以替代抗生素，乳铁蛋白还能刺激肠道细胞的生长，增加肠道中有益菌群，如双歧杆菌和乳酸杆菌等的数量，减少大肠杆菌等有害菌群的繁殖，从而保障仔猪肠道健康发育，增强仔猪肠道对营养物质的消化、吸收能力，降低腹泻率，提高其生长性能，促进仔猪生长。
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公开(公告)号：CN101508969A
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200910071260.7
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreas necrosis virus，IPNV)VP2蛋白的重组干酪乳杆菌及制法。根据传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有IPNV VP2基因主要抗原位点的1095bp目的片段，将扩增得到的IPNV VP2基因与表面表达的载体质粒pPG1进行连接，通过电转化进入宿主菌干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393细胞内，含阳性重组质粒pPG1－IPNV VP2的干酪乳杆菌命名为pPG1－IPNV VP2/L.casei 393。将重组pPG1－IPNV VP2/L.casei 393在乳糖的诱导下进行表达。本发明中构建了传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白干酪乳杆菌表达载体系统，表达了含有IPNV VP2蛋白主要抗原位点的约40KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与IPNV免疫血清发生反应，表明重组VP2蛋白与IPNV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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