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公开(公告)号：CN112899294B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN110499336B
公开(公告)日：2021-10-12
申请号：CN201910782039.6
申请日：2019-08-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/90
Abstract: 本公开涉及基因工程技术领域，特别涉及一种利用小分子化合物提高基因组定点修饰效率的方法。该方法通过CRISPR/Cas9系统与小分子化合物共同作用于细胞来实现。具体地为，CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段，可以定点识别目的基因，并使目的基因发生双链断裂，而在断裂处，小分子化合物发挥作用，进行同源重组修复，高效的完成基因组定点修饰，经小分子化合物处理的细胞基因组定点修饰效率显著提高。
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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN112899294A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110846297A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170441.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶，葡聚糖酶和纤维素酶，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号：CN110499336A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910782039.6
申请日：2019-08-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/90
Abstract: 本公开涉及基因工程技术领域，特别涉及一种利用小分子化合物提高基因组定点修饰效率的方法。该方法通过CRISPR/Cas9系统与小分子化合物共同作用于细胞来实现。具体地为，CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段，可以定点识别目的基因，并使目的基因发生双链断裂，而在断裂处，小分子化合物发挥作用，进行同源重组修复，高效的完成基因组定点修饰，经小分子化合物处理的细胞基因组定点修饰效率显著提高。
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公开(公告)号：CN114646764B
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202210367234.4
申请日：2022-04-08
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室云浮分中心
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , C12N5/076
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种ARHGAP35蛋白在猪X和Y精子鉴定或分离中的应用。本发明利用DIA蛋白组学技术对猪X、Y精子膜蛋白进行蛋白质组学分析，然后鉴定筛选到在X精子膜蛋白中特异性表达的蛋白ARHGAP35，可以作为分离猪X、Y精子的性别特异性标识蛋白。
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公开(公告)号：CN110846336B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN113088529B
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202110638095.X
申请日：2021-06-08
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23L33/00 , A23K20/189 , A01K67/027
Abstract: 本发明通过高膳食纤维饲料诱导，取竹鼠盲肠、结肠食糜，分离其微生物总RNA，通过宏转录组学分析筛选糖苷水解酶基因，获得有表达β‑葡聚糖酶功能的新型β‑葡聚糖酶基因HG278，该基因编码的β‑葡聚糖酶在pH3.0~8.0酶活力呈锯齿形变化，对胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶具有较高的耐受力，非常适合在猪胃肠道中发挥功能，是一种良好的饲料和食品，亦可用于制备用于改善胃肠道内环境、药品、食品、保健品等用途的酶制剂，具有较广泛的用途。
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