公开(公告)号：CN118191315A

公开(公告)日：2024-06-14

申请号：CN202410322139.1

申请日：2024-03-20

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李娜 ,  龚晓晴 ,  杨富娴 ,  冯耀宇 ,  肖立华 ,  郭亚琼 ,  许瑞 ,  孙晓华

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/68 ,  C07K16/20

Abstract: 本发明公开了CP2蛋白多克隆抗体作为隐孢子虫纳虫空泡膜定位标签抗体的应用。本发明通过对微小隐孢子虫的CP2蛋白进行原核表达，纯化蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，进行ELISA和WB检测抗体效价证明多抗有效，随后进行间接免疫荧光和免疫电镜检测抗体确定其定位于隐孢子虫纳虫空泡膜上，能特异性识别微小隐孢子虫CP2蛋白，即纳虫空泡膜，能作为标签定位隐孢子虫纳虫空泡，对于隐孢子虫未知蛋白的定位研究具有重要作用；通过免疫荧光定位还能对入侵细胞的隐孢子虫进行定位，并鉴定出更多与微小隐孢子虫入侵和发育相关的关键蛋白，用于抗隐孢子虫病的药物或疫苗的开发。

公开(公告)号：CN116068177A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202310034659.8

申请日：2023-01-10

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 肖立华 ,  孙连静 ,  冯耀宇 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/533 ,  G01N33/577 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光试剂、试剂盒及其应用，属于生物技术领域。本发明通过利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原，采用杂交瘤细胞单克隆抗体技术制备获得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体；用荧光染料标记步骤S1所得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体，即获得检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光检测试剂。应用本发明试剂建立的直接免疫荧光检测方法，可用于临床粪便样本及环境中微小隐孢子虫的检测及鉴定，且敏感性高、特异性强、稳定性好、诊断速度快，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN114247423A

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN202011022102.5

申请日：2020-09-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 张玉龙 ,  李永涛 ,  陈华毅 ,  李娜 ,  党蕊娟 ,  王进进 ,  林铫 ,  安一方

IPC: B01J20/20 ,  B01J20/30 ,  C02F1/28 ,  C02F101/20

Abstract: 本发明公开了一种磷酸修饰的角蛋白基生物炭及其制备方法与应用，属于水体资源化利用技术领域。所述的磷酸修饰的角蛋白基生物炭的制备方法，包括如下步骤：(1)将角蛋白废弃物洗净后进行烘干、剪碎处理，得到处理后的角蛋白废弃物；(2)将处理后的角蛋白废弃物经炭化、冷却处理，得到未修饰生物炭；(3)将未修饰生物炭与磷酸溶液混合浸渍后再进行炭化、冷却处理，得到样品1；(4)将样品1经洗涤、烘干后即得磷酸修饰的角蛋白基生物炭。本发明所制备的磷酸修饰的角蛋白基生物炭对镉、铅的吸附效果良好，分别是未修饰生物炭的1.38和5.41倍。

公开(公告)号：CN111820185A

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN202010712347.4

申请日：2020-07-22

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  黄妮 ,  贾瑞莲 ,  李娜 ,  郭亚琼 ,  肖立华

IPC: A01K67/02

Abstract: 本发明公开了一种IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁方法及其应用，所述扩繁方法为先将购买的IFN–γ基因缺陷杂合子交配，再将其子代中的纯合子和杂合子进行交配，再将子代中的雄性和雌性纯合子交配即可获得大量IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠，实现IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁，同时获得的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠较直接购买的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠体质正常，可更好用于隐孢子虫体外感染模型建立，极低剂量即可造成快速、慢性感染，且过程中小鼠死亡率低，可以满足隐孢子虫感染需要较长研究周期的要求。而且扩繁后获得的FN–γ基因缺陷纯合子小鼠可再直接纯纯交配产后代，实现大量扩繁，无需再经过复杂的纯杂交配。

公开(公告)号：CN109959551A

公开(公告)日：2019-07-02

申请号：CN201910149359.8

申请日：2019-02-28

Applicant: 华东理工大学 ,  华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  黄成琛 ,  王元非 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: G01N1/40

Abstract: 本发明涉及一种采用絮凝技术富集水样中寄生虫卵(孢)囊的方法，包括采集水样；水样中加入絮凝剂，其体积是水样体积的1％‑3％，絮凝剂为摩尔浓度均介于0.5‑1.5mol/L之间的CaCl2水溶液和NaHCO3水溶液，将加入絮凝剂后的水样的pH值调至10±0.1，静置形成第一沉淀；第一沉淀中加入氨基磺酸溶液，离心分离后得第二沉淀，第二沉淀中加入杜氏磷酸盐缓冲液，离心分离后得富集有寄生虫卵(孢)囊的离心沉淀，杂质溶解于氨基磺酸溶液和/或杜氏磷酸盐缓冲液中被去除。本发明还涉及其在寄生虫卵(孢)囊检测中的应用。根据本发明的方法，应用简便、快速，便于后续检测，避免了现有技术中富集操作复杂并引起误差的问题。

公开(公告)号：CN109735513A

公开(公告)日：2019-05-10

申请号：CN201811497728.4

申请日：2018-12-07

Applicant: 华东理工大学 ,  华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  苏嘉缘 ,  张强 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶的纯化方法，先通过构建隐孢子虫蛋白激酶的体外重组表达载体，再进行质粒转导、IPTG低温诱导表达，成功表达后的菌体裂解后，经割胶回收纯化蛋白；本发明纯化方法通过低温诱导以及改善IPTG浓度的方式，提高了表达蛋白的可溶性，同时通过割胶回收的方法解决了隐孢子虫蛋白激酶在体外表达中易出现的自切降解包涵体表达等问题，能够得到高纯度条带单一且具备酶学活性的重组蛋白，并且能够提高对难以表达、分子量较大蛋白的纯化效果。所纯化得到的蛋白能够进一步用于功能性分析研究，为解决隐孢子虫蛋白功能领域的诸多问题奠定基础。

公开(公告)号：CN109136386A

公开(公告)日：2019-01-04

申请号：CN201810828293.0

申请日：2018-07-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯耀宇 ,  郭亚琼 ,  李娜 ,  王元非

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。

公开(公告)号：CN118436628B

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202410470536.3

申请日：2024-04-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 夏宁波 ,  杜蕙妤 ,  冯耀宇 ,  肖立华 ,  李娜 ,  郭亚琼 ,  元冬娟 ,  许瑞

IPC: A61K31/167 ,  A61K31/277 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明公开了二苯基脲类化合物在制备抗弓形虫药物中的应用。本发明通过对咪唑苯脲及二苯基脲类化合物的体外抗弓形虫的研究，得到7种能有效抑制弓形虫生长的化合物，对弓形虫的体外抑虫率高，能够显著抑制虫体噬斑的形成，很好地抑制弓形虫的增殖；其中二苯基脲类化合物：1,3‑双(3‑氟苯基)脲、1‑(3‑溴苯基)‑3‑(4‑氯苯基)脲、1‑(3‑氯苯基)‑3‑(4‑氯苯基)脲，细胞毒性较小，还能用于治疗小鼠感染的弓形虫病，显著抑制弓形虫在体内繁殖，且不会影响小鼠生长，具有显著的抑虫效果，可以用于制备和开发更多的抗弓形虫药物。

公开(公告)号：CN116068177B

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202310034659.8

申请日：2023-01-10

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 肖立华 ,  孙连静 ,  冯耀宇 ,  李娜 ,  郭亚琼

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/533 ,  G01N33/577 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光试剂、试剂盒及其应用，属于生物技术领域。本发明通过利用微小隐孢子虫全虫蛋白作为抗原，采用杂交瘤细胞单克隆抗体技术制备获得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体；用荧光染料标记步骤S1所得抗微小隐孢子虫的单克隆抗体，即获得检测微小隐孢子虫的直接免疫荧光检测试剂。应用本发明试剂建立的直接免疫荧光检测方法，可用于临床粪便样本及环境中微小隐孢子虫的检测及鉴定，且敏感性高、特异性强、稳定性好、诊断速度快，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN118360157B

公开(公告)日：2024-12-24

申请号：CN202410336425.3

申请日：2024-03-22

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 夏宁波 ,  张鸿曦 ,  冯耀宇 ,  肖立华 ,  李娜 ,  郭亚琼 ,  元冬娟 ,  许瑞

IPC: C12N1/11 ,  C12N15/85 ,  C12N15/52 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  A61K39/002 ,  A61P33/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用。本发明提供一株弓形虫基因缺失疫苗虫株(Δscsα)，该虫株通过基因编辑技术敲除弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基(TgSCSα)基因得到；弓形虫敲除TgSCSα后在体外仍可培养、在体内具有几乎无毒的特性；动物免疫接种Δscsα后，能够产生良好的免疫保护力，有效抵抗野生型弓形虫的感染。TgSCSα具有作为弓形虫疫苗设计靶点的潜力，能用于制备弓形虫基因缺失疫苗虫株。Δscsα是一株具备良好应用前景的候选疫苗虫株，可以为弓形虫病的防控提供更多选择和策略。