转人神经生长因子基因猪的制备方法

    公开(公告)号:CN111500641A

    公开(公告)日:2020-08-07

    申请号:CN202010402846.3

    申请日:2020-05-13

    Abstract: 本发明公开了一种转人神经生长因子基因猪的制备方法。该方法包括如下步骤:a、构建靶向pNGF基因外显子的CRISPR/Cas9系统表达载体;b、构建提供hNGF基因的同源重组载体;c、将CRISPR/Cas9系统表达载体与hNGF基因的同源重组载体共转染猪耳成纤维细胞;d、转染后的猪耳成纤维细胞经筛选后,获得阳性细胞系,并通过体细胞克隆获得转人神经生长因子的转基因猪。本发明通过定点基因重组的方式,将hNGF基因插入猪pNGF基因位点,从而获得的转人神经生长因子基因猪,可以表达人神经生长因子而不表达猪神经生长因子,避免了在猪唾液中收集人源NGF时,其中还混有猪源NGF的现状,也避免其在用作药物治疗时的免疫原性问题,更加安全和有效。

    提高基因组定点整合效率的抑制剂及其应用

    公开(公告)号:CN111394393A

    公开(公告)日:2020-07-10

    申请号:CN202010116317.7

    申请日:2020-02-25

    Abstract: 本发明公开了通过筛选出可以提高基因组定点整合效率的抑制剂,包括组蛋白去乙酰化酶抑制剂或JAK抑制剂中的至少一种。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以在基因组定点整合时,抑制组蛋白的去乙酰化,而促进组蛋白的乙酰化,进而有利于DNA与组蛋白八聚体的解离,核小体结构松弛,从而使各种转录因子和协同转录因子能与DNA结合位点特异性结合,激活基因的转录及定点整合效率。JAK抑制剂通过抑制细胞JAK自发性磷酸化,影响其与STAT蛋白结合,使STAT转录因子磷酸化不能有效转移至细胞核内,影响非DNA连接因子的结合,有利于NHEJ/HDR因子的结合,进而有效增加基因整合至基因组的概率,提高基因组定点整合效率。

    一种卵母细胞培养液及提高卵母细胞质量的体外培养方法

    公开(公告)号:CN110846272A

    公开(公告)日:2020-02-28

    申请号:CN201911231323.0

    申请日:2019-12-05

    Abstract: 本发明提供了一种卵母细胞培养液,该培养液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相对于未成熟的卵泡液,成熟的卵泡液对卵母细胞体外成熟有积极作用的物质丰度更高,离成熟期越近的卵泡,它的卵泡液越能促进卵母细胞IVM,并改善其质量。使用体内成熟卵泡液作为卵母细胞体外成熟培养液的组分能有效提高卵母细胞的质量,并且能降低卵母细胞中的ROS含量。由此。不仅可以用来改善各种物种(如:牛、羊等)的卵母细胞体外成熟,提高制备优质的体外受精胚胎及克隆胚胎的生产率,还可供人类辅助生殖中卵母细胞体外培养成熟的运用提供参考,以改进现有的卵母细胞体外成熟的培养体系,从而促进生物医学的发展。

Patent Agency Ranking