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公开(公告)号：CN109136386B
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN201810828293.0
申请日：2018-07-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种对卡耶塔环孢子虫进行快速分型和溯源的定量PCR方法，采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组不同拷贝间的多态性连接区域作为遗传标记，设计了特异性的定量PCR引物，包含上游引物Cyc‑Mito‑F1和下游引物Cyc‑Mito‑R1，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。本发明方法克服了现有的卡耶塔环孢子虫单位点分子诊断工具无法对该病原进行精细分型的缺点，而且扩增效率比现有的单位点分子诊断工具高；本发明采用卡耶塔环孢子虫线粒体基因组上的单个位点定量PCR和熔解曲线分析就可进行快速的基因型区分和溯源，克服了现有的卡耶塔环孢子虫多位点序列分型工具中因需要对多个位点扩增和测序所导致的分型耗时长、成本高的缺点，具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN112724223A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011588887.2
申请日：2020-12-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K14/44 , C12N15/30 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K16/20 , G01N33/533 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种毕氏肠微孢子虫孢壁蛋白单克隆抗体的制备及其应用。基于重组蛋白EbSWP1制得的单克隆抗体对于检测毕氏肠微孢子虫具有良好的特异性，不与虾肝肠微孢子虫、兔脑炎微孢子虫、大肠杆菌等发生反应。本发明制备的单克隆抗体可与荧光素标记物偶联制得免疫荧光抗体，利用该抗体与环境、粪便中的毕氏肠微孢子虫做直接免疫荧光反应，可以快速、灵敏、准确地检验毕氏肠微孢子虫。与实验室最常用的PCR检测方法相比，本发明的免疫荧光检测方法操作简便，耗费时间短，且检测准确度高，以PCR结果为参考，本发明检测方法的准确率高于85％，该方法简便、快速、灵敏、准确的特点使其适用于基层检测应用。
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公开(公告)号：CN111154792A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010027841.7
申请日：2020-01-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种隐孢子虫蛋白激酶660C端蛋白的制备及其应用，包括如下步骤：S1.以SEQ ID NO：1～2所示扩增引物PCR扩增反应得到Cp660C基因片段；S2.将Cp660C基因片段与原核表达质粒双酶切，连接，得到Cp660C重组质粒；S3.将Cp660C重组质粒转入表达宿主菌，挑取阳性克隆菌；S4.将阳性克隆菌扩大培养至生长对数期，诱导表达；S5.诱导表达后的菌液，冷冻离心收集菌体，弃上清，清洗菌体后重悬，添加蛋白酶抑制剂，冰浴超声裂解菌体，得裂解液，再低温离心取上清，滤膜过滤；S6.取步骤过滤后上清液经Ni柱纯化，洗脱，收集目的蛋白。本发明方法能够得到高纯度、高抗原特异性的重组蛋白，所纯化得到的蛋白能够进一步用于隐孢子虫蛋白功能性分析研究。
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公开(公告)号：CN118086351B
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN118440972A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410507411.3
申请日：2024-04-25
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因的微小隐孢子虫基因敲除虫株及其应用。本发明研究显示CpMuc25基因与虫体毒力相关，作为靶点能用于在筛选或制备抗微小隐孢子虫病的药物；本发明提供一种微小隐孢子虫CpMuc25基因敲除虫株，通过基因编辑技术缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因成功构建得到；在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株敲除CpMuc25基因后，仍然可以体外培养，其体外生长速度减缓，进行体内免疫后，感染后的小鼠临床症状减轻，致死时间滞后，致死率显著降低，具有毒力减弱的优点，能用于制备抗微小隐孢子虫药物预防微小隐孢子虫感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118360157A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410336425.3
申请日：2024-03-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/11 , C12N15/85 , C12N15/52 , C12N9/22 , C12N15/113 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用。本发明提供一株弓形虫基因缺失疫苗虫株(Δscsα)，该虫株通过基因编辑技术敲除弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基(TgSCSα)基因得到；弓形虫敲除TgSCSα后在体外仍可培养、在体内具有几乎无毒的特性；动物免疫接种Δscsα后，能够产生良好的免疫保护力，有效抵抗野生型弓形虫的感染。TgSCSα具有作为弓形虫疫苗设计靶点的潜力，能用于制备弓形虫基因缺失疫苗虫株。Δscsα是一株具备良好应用前景的候选疫苗虫株，可以为弓形虫病的防控提供更多选择和策略。
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公开(公告)号：CN118086351A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN113552335B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN202010446599.7
申请日：2020-05-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/532 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N23/04 , G01N23/20
Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。
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公开(公告)号：CN114164114B
公开(公告)日：2022-12-13
申请号：CN202111495124.8
申请日：2021-12-08
Applicant: 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室
IPC: C12N1/11 , C12N15/79 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 弓形虫核酮糖‑5‑磷酸异构酶TgRPI基因编辑虫株及其应用。本发明公开了一个有潜力的疫苗和药物设计靶点和一种预防弓形虫感染的基因敲除虫株。所述疫苗和药物设计靶点为弓形虫核酮糖‑5‑磷酸异构酶TgRPI基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。所述基因敲除虫株敲除了TgRPI基因，该基因敲除虫株在体外生长速度减缓，但是可以传代培养，在动物体内具有毒力小、繁殖少等特性，能提高动物对弓形虫的免疫能力。由于TgRPI对弓形虫体内外生长有重要作用，故有成为疫苗和药物靶点的潜力，且该基因敲除虫株有成为抗弓形虫基因工程疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN114540508A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202210228164.4
申请日：2022-03-08
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6848 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于牛中常见艾美耳球虫检测和虫种鉴定的巢式PCR方法及试剂盒。本发明采用牛的艾美耳球虫SSU rRNA基因作为检测靶序列，所述序列中具有保守区域和可变区域，相应扩增片段中包含多个单核苷多态性位点；本发明进一步通过设计巢式PCR引物，建立了牛中常见艾美耳球虫巢式PCR检测方法，可检测出不同的牛中常见艾美耳球虫，进行艾美耳球虫的虫种鉴定。采用本发明的检测方法能够最低检测到一个卵囊，其扩增效率高，检测灵敏，可以准确区分牛感染的不同艾美耳球虫，并确定引起发病的不同虫种，用于牛球虫病的精准防控。
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