公开(公告)号：CN107099533A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710483275.9

申请日：2017-06-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  尹智 ,  翁晓刚

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/113 ,  C07K14/4743 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/907 ,  C12N2310/10 ,  C12N2810/10

Abstract: 一种特异靶向猪IGFBP3基因的sgRNA导向序列及应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTCTCGCGCTTGGACTCAG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑IGFBP3基因，进而消除IGFBP3的表达，为制备IGFBP3转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。

公开(公告)号：CN103245546B

公开(公告)日：2015-07-01

申请号：CN201310163061.5

申请日：2013-05-07

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 格日乐其木格 ,  刘忠华 ,  何文腾 ,  朱江

IPC: G01N1/30 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种简易快速的猪囊胚差异染色方法，属于发育生物学技术领域。是对猪囊胚进行表面活性剂TritonX100透膜处理后，利用两种核染料碘化丙啶和Hoechst的分子大小上的区别对囊胚外层滋养层细胞和内侧的内细胞团细胞进行差异染色。本发明简化了对猪囊胚进行差异染色的实验步骤，大大缩短了实验时间，并且降低了实验成本。

公开(公告)号：CN104152406A

公开(公告)日：2014-11-19

申请号：CN201410400520.1

申请日：2014-08-15

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 张宇 ,  李海 ,  刘忠华 ,  连正兴

IPC: C12N5/077

Abstract: 本发明公开了一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所提供的制剂是由肌源成纤维细胞提取物、丙酮酸盐和钙盐组成。其中，肌源成纤维细胞提取物是鸡肌源成纤维细胞经超声波裂解后，分离得到小于10KDa的蛋白液经真空干燥获得的；钙盐和丙酮酸盐可为丙酮酸钙。本发明所提供的制剂具有成份简单易得、使用简便有效的特点，可显著提高鸡骨骼肌成肌细胞的融合率，促进骨骼肌纤维直径的增大及功能性收缩蛋白的表达。利用本发明提供的制剂培养成肌细胞，成肌细胞的融合率提高32.01％，肌管中的平均细胞核数提高91.63％，肌管平均直径增加45.59％。

公开(公告)号：CN103710310A

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201310731226.4

申请日：2013-12-26

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 张宇 ,  刘忠华 ,  史久慧 ,  邢舰誉

IPC: C12N5/10 ,  C12N5/077

Abstract: 本发明公开了一种诱导小鼠诱导型多能干细胞骨向分化的方法及其培养基。本发明提供的方法是将小鼠多能干细胞接种到分化培养基I中形成间质细胞富集的拟胚体，再分离拟胚体并在分化培养基II中培养获得成骨细胞。本发明公开的分化培养基I是在成纤维细胞培养基基础上添加全反式维甲酸和碱性成纤维细胞生长因子，分化培养基II是在成骨细胞培养基的基础上降低D-葡萄糖含量，并添加BMP4或BMP7。本发明提供方法和培养基能够显著促进小鼠多能干细胞的骨向分化，具备周期短、分化率高、效果稳定等特点，具有广阔的应用前景和实用价值。

公开(公告)号：CN103589682A

公开(公告)日：2014-02-19

申请号：CN201310608158.2

申请日：2013-11-26

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 郇延军 ,  孔庆然 ,  刘忠华 ,  朱江 ,  吕明

IPC: C12N5/075 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明提供了一种提高体外受精胚胎发育率的方法，在确定卵母细胞成熟培养时间范围的基础上，检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将卵母细胞体外成熟培养至谷胱甘肽含量下降前进行体外受精。本发明为今后体外受精胚胎的生产和相关科学研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN103468707A

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201310409329.9

申请日：2013-09-10

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  尹智 ,  刘忠华 ,  周洋

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种猪印迹基因Grb10及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Grb10基因第17外显子157位和215位碱基的SNP位点，进一步应用该位点鉴定Grb10基因的印迹状态。本发明所公开的猪印迹基因Grb10，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Grb10基因异常疾病。

公开(公告)号：CN103352072A

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201310162370.0

申请日：2013-05-07

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 格日乐其木格 ,  刘忠华 ,  孙铭菊 ,  何文腾 ,  刘世超 ,  胡魁

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种转基因种公猪选择方法及其应用，属于家畜遗传育种技术领域。对出生之后的猪，首先进行表型评判，再进行成纤维细胞内外源基因DNA-FISH测试，对性成熟之后的猪，常规的精子质量检测结果结合精子的外源基因DNA-FISH测试，对精子进行体外受精，对获得胚胎发育情况进行评估，结合胚胎内外源基因DNA-FISH测试估测精子的受精能力及对外源基因的遗传能力，淘汰无生殖能力或遗传能力的个体。通过对父代个体的初级筛选可大大降低对无用转基因候选公猪的饲养和管理费用，大大减轻猪场的运行成本。

公开(公告)号：CN102851279B

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201210134764.0

申请日：2012-05-04

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  武美玲 ,  刘忠华

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/907 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/07 ,  A01K2227/108 ,  C07H21/04 ,  C12N15/79 ,  C12N15/85 ,  C12N15/8509

Abstract: 本发明公布了一种猪ROSA26特异性整合位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述，通过其衍生的打靶载体系列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用的ROSA26特异性位点在猪或高等哺乳动物基因组中不会受到免疫介导的排斥和表观遗传修饰，能介导外源基因稳定高效的表达。提供的ROSA26特异性位点打靶载体可以高效特异的实现打靶。

公开(公告)号：CN103245546A

公开(公告)日：2013-08-14

申请号：CN201310163061.5

申请日：2013-05-07

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 格日乐其木格 ,  刘忠华 ,  何文腾 ,  朱江

IPC: G01N1/30 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种简易快速的猪囊胚差异染色方法，属于发育生物学技术领域。是对猪囊胚进行表面活性剂TritonX100透膜处理后，利用两种核染料碘化丙啶和Hoechst的分子大小上的区别对囊胚外层滋养层细胞和内侧的内细胞团细胞进行差异染色。本发明简化了对猪囊胚进行差异染色的实验步骤，大大缩短了实验时间，并且降低了实验成本。

公开(公告)号：CN101921808B

公开(公告)日：2012-05-30

申请号：CN201010256337.0

申请日：2010-08-18

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  刘忠华 ,  石永乾 ,  朱江 ,  王娟

IPC: C12N15/877

Abstract: 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，属于繁殖或授精方法领域。通过用小分子药物Calyculin A处理供体细胞，诱使供体核染色质凝聚、甲基化升高和乙酰化降低，体细胞核表观遗传修饰的“归零”，然后进行核移植，构建重构胚，通过优化条件，选择最佳浓度10nM，及处理时间30min，使猪克隆胚胎体外发育囊胚率提高了9.7％，囊胚细胞数增加了23.78个，为提高克隆动物的生产效率奠定了基础。