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公开(公告)号：CN119432722A
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202411702162.X
申请日：2024-11-26
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提出了一种活检液及其在猪囊胚激光切割中的应用，属于动物生物技术领域。本发明提供了一种活检液及其制备方法，并且该活检液可应用于利用激光切割进行猪囊胚活检中，解决了目前利用激光切割猪囊胚没有适配的活检液的问题，本发明还提供了一种利用上述活检液进行激光切割猪囊胚的方法，解决了现有技术中利用激光切割猪囊胚可能导致的胚胎细胞损伤及损害胚胎发育潜力等问题。该活检液及其使用方法能够高效、准确的应用于猪囊胚滋养层细胞的获取，并且成本低、重复性好。
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公开(公告)号：CN118813526A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202411219723.0
申请日：2024-09-02
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 一种用于猪胚胎X染色体失活的体外培养基及其应用，属于动物胚胎体外培养技术领域。本发明为解决现有技术中的胚胎体外培养液存在X染色体失活延迟，所获得的囊胚质量较差的技术问题，提供一种用于猪胚胎X染色体失活的体外培养基及其应用，所述体外培养基由添加N‑2添加剂和B‑27添加剂的基础培养基、胰岛素类生长因子、激活素类细胞因子、Rock通路抑制剂和维甲酸类化合物构成。本发明所提供的体外培养基可以有效提升囊胚率、可以增加囊胚细胞数、并且使囊胚发生X染色体失活，较好的模拟体内XCI过程，提高了所获得的囊胚质量，可应用于体外猪胚胎X染色体失活。
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公开(公告)号：CN118480135A
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410697366.2
申请日：2024-05-31
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种基于液相分离技术的RNA实时示踪系统及其应用，属于活细胞检测技术领域。本发明为解决现有技术中MCP‑MS2系统存在目标RNA表达与转运不稳定，成像信噪比较低，荧光背景较高的技术问题，提供一种基于液相分离技术的RNA实时示踪系统，所述RNA实时示踪系统包括MS2环状结构和MS2外壳蛋白。本发明提供的RNA实时示踪系统实现了活细胞内源性和外源性RNA成像和双色荧光标记的目的，提升了靶标位点的荧光信号，显著提高了信噪比，降低了荧光背景。本发明提供的RNA实时示踪系统可应用于活细胞RNA实时示踪成像，具体指利用RNA实时示踪系统对RNA的空间定位、蛋白翻译和RNA位移过程进行监控。
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公开(公告)号：CN117418319A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202311275904.0
申请日：2023-09-28
Applicant: 东北农业大学
IPC: C40B40/02 , C40B50/06 , C12N15/12 , C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种猪全转录因子激活文库构建方法及其筛选调控OCT4基因的转录因子的方法，属于分子生物学领域。本发明解决了目前基因组规模的功能获得筛选方法在很大程度上局限于cDNA文库过表达系统的使用，而合成和使用聚合cDNA文库的成本高且复杂的问题。本发明为了筛选猪中调控OCT4表达的转录因子，构建了猪全转录因子CRISPR激活文库，具体技术方案如下：首先筛选猪的转录因子，针对转录因子设计合成sgRNA后构建慢病毒sgRNA文库，同时构建既表达OCT4启动子驱动的EGFP，又表达dCas9‑SAM系统元件的细胞系，最后利用构建好的sgRNA文库感染该细胞系，再通过sgRNA富集来筛选调控OCT4表达的转录因子。本研究所述的方法可为猪这一物种筛选和研究转录因子功能及调控网络提供有力的工具。
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公开(公告)号：CN117050935A
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202310913897.6
申请日：2023-07-24
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开一种诱导猪多能性细胞的诱导剂以其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。为了提供一种利用表达内源性重编程因子获得多能性细胞的方法。本申请公开一种诱导猪多能性细胞的诱导剂，所述诱导剂为以Cas12a‑Activ载体作为基础载体骨架，将24个基因的sgRNA串联合成一个片段，然后连接到基础载体骨架中获得Cas12a‑Activ‑24重组载体或以Cas12a‑Activ载体作为基础载体骨架，将10个基因的sgRNA串联合成一个片段，然后连接到基础载体骨架中获得Cas12a‑Activ‑10重组载体。CRISPR内源激活的重编程方法拓宽了猪成纤维细胞重编程的可用工具。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115948477A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202210856638.X
申请日：2022-07-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。
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公开(公告)号：CN107099850A
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201710463397.1
申请日：2017-06-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C40B50/06 , C12N15/113
CPC classification number: C12N15/1082 , C12N15/113 , C12N2310/10 , C40B50/06
Abstract: 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法，涉及一种基因组敲除文库的构建方法。是要解决现有敲除文库构建方法存在物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力的问题。方法：一、构建Mspl.f‑library文库；二、获得20bp gRNA靶序列片段；三、构建PAM‑f.library文库；四、Lenti‑gRNA‑library文库构建。本发明获得gRNA文库的方法不依赖于已知物种基因组序列信息，避免了物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力等缺点，大大提高敲除文库的覆盖率。本发明用于构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库。
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公开(公告)号：CN103468705A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310409326.5
申请日：2013-09-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪印迹基因Slc22a3，属于分子遗传学领域。本发明通过克隆获得Slc22a3基因，并通过比较36头亲本猪耳组织测序结果发现Slc22a3的第10外显子第20个碱基存在SNP突变，进一步应用该位点鉴定Slc22a3基因的印迹状态。本发明所公开的猪印迹基因Slc22a3，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Slc22a3基因异常疾病。
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公开(公告)号：CN101886075A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN201010215527.8
申请日：2010-07-02
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/09
Abstract: 本发明公布了猪ROSA26启动子序列及其应用，根据鼠，牛，人中ROSA26位点的序列比对得到保守序列，根据保守序列设计引物扩增得到猪内源ROSA26启动子；得到的ROSA26启动子用于外源基因的GFP的表达，GFP蛋白在猪中得到广泛稳定的表达，可解决转基因猪外源基因表达的不稳定性以及位置效应的不可预知性，为工业化生产提供了可能。
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公开(公告)号：CN119081216A
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202411198770.1
申请日：2024-08-29
Applicant: 东北农业大学
IPC: C08J9/28 , C08J3/075 , C08J3/28 , C08L89/00 , C08L5/08 , C12N5/077 , C12N5/071 , A61L27/22 , A61L27/20 , A61L27/50 , A61L27/52 , A61L27/56
Abstract: 本发明公开一种基于序贯温控的复合多孔水凝胶微球制备方法和应用，属于生物材料与细胞培养交叉技术领域。为了针对在制备微载体的时候壳聚糖不易溶解，无法调控水凝胶微球尺寸的技术问题，本发明公开利用甲基丙烯酸酐改性明胶和甲基丙烯酸酐改性壳聚糖溶于含光引发剂的1×PBS中，加入乳化剂得到预聚液，另将乳化剂溶于石蜡油中，即得到含0.1％‑0.4％乳化剂的油相溶液；将预聚液以0.1‑1mL/min的速度滴入油相溶液中，经过搅拌获得W/O乳液，以100mw/cm2的光照强度，在405nm的蓝光下暴露30s‑5min进行光固化得到水凝胶微球，经过冷冻处理获得多孔水凝胶微球，为细胞的3D培养提供更多的选择。
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