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公开(公告)号：CN109853046A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201811348105.0
申请日：2018-11-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明是一种快速构建CRISPR/Cas9基因编辑载体库的方法，包括以下步骤：设计特异性sgRNA；人工合成寡核苷酸DNA，并分别在上下游引物的5’端加入粘性末端DNA碱基；DNA寡核苷酸双链退火，形成双链sgRNA；利用T4/T7 DNA连接酶将双链sgRNA连接至酶切线性CRISPR/Cas9质粒中；将连接产物转化大肠杆菌提取质粒后得到编辑载体库。本发明利用双链退火原理构建了一种规模化基因编辑载体构建的方法，具有很好的正确率、覆盖度和均一性，可通过一次操作实现成百上千个基因编辑载体的构建，大幅提高载体构建效率，对于各物种基因功能研究和种质资源开发都具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109696493A
公开(公告)日：2019-04-30
申请号：CN201811378045.7
申请日：2018-11-19
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种检测烟用香精中16种多环芳烃的方法，包括如下步骤：样品处理和超高效液相色谱双波长分析。本发明建立了烟用香精中16种多环芳烃含量的超高效液相色谱双波长分析方法。16种多环芳烃的线性范围介于0.002μg/mL~10μg/mL，3个水平加标平均回收率在84.1%~114%之间，相对标准偏差为1.2%~5.7%，定量限为0.3μg/kg~2μg/kg。该方法灵敏、准确，适用于烟用香精中16种多环芳烃的含量分析。
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公开(公告)号：CN109234309A
公开(公告)日：2019-01-18
申请号：CN201811334235.9
申请日：2018-11-09
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种发根农杆菌介导的烟草红花大金元转化方法，属于植物基因工程领域。该方法包括如下步骤：烟草红花大金元种子的消毒、烟草幼苗植株培养、烟草叶盘预培养、发根农杆菌的菌液制备、侵染与共培养、发状根培养、发状根愈伤组织培养、分化芽培养和再生植株生根培养。本发明通过发根农杆菌介导的烟草转化技术，建立发根农杆菌在烟草红花大金元转化上的稳定再生体系，该方法同时可以使转化再生植株具有较高生根率，以及较高的转化效率。
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公开(公告)号：CN108541573A
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201810360878.4
申请日：2018-04-20
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: A01G31/00
Abstract: 本发明涉及一种促进烟草早花来获得短周期烟草的方法。将烟草组培幼苗从培养瓶中取出，洗净消毒后移植于种植板上；随后将种植板放置于种植槽表面，同时种植槽中提前打入充足的营养液。在烟草栽培的全过程中，保持环境温度26±1℃，环境湿度60%-70%，空气中二氧化碳的浓度为400-500ppm。通过改变烟草的外界生长环境直接促使烟草早花，进而缩短烟草生长周期，加快烟草育种进程。具有使用方便、效果好、无风险等优点。
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公开(公告)号：CN108112475A
公开(公告)日：2018-06-05
申请号：CN201711331461.7
申请日：2017-12-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明是一种用维生素C、L-半胱氨酸和亚硫酸氢钠防烟草外植体褐化的方法，包括如下步骤：植物种子的消毒、植物种子培养、烟草外植体诱导培养、外植体增殖培养后进行外植体愈伤组织防褐化培养，所述的防褐化培养基为：MS基本培养基中加入防褐添加剂20-100mg/L维生素C，50-300mg/L L-半胱氨酸，50-100mg/L亚硫酸氢钠，30g/L蔗糖，4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7。褐化培养处理后，可以有效缓解褐化现象，改善外植体整体的分化状态。添加维生素C、L-半胱氨酸和亚硫酸氢钠在培养基中，具有使用方便、成本低、效果好等优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108004184A
公开(公告)日：2018-05-08
申请号：CN201810009043.4
申请日：2018-01-04
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种芽孢杆菌及其用于生产异戊酸的方法。该芽孢杆菌（Bacillus）是从醇化中期烟叶上通过选择性培养基分离得到的，已于2017年9月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.14609。该菌株能够以烟草工业废弃物为原料合成异戊酸，该异戊酸为无色黏稠液体，高度稀释后则有甜润的果香，以及笃斯越橘样的香味。在本发明利用芽孢杆菌合成异戊酸的过程中使用的发酵培养基不仅成本低廉，而且可以处理烟草工业产生的大量废弃物，在保护环境和合理利用资源方面都有着积极的作用，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN107950395A
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201711329630.3
申请日：2017-12-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明涉及一种基于活性炭和维生素C的烟草外植体防褐化方法，包括如下步骤：步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养；步骤（3），烟草外植体培养；步骤（4），防褐化培养；本发明不仅可以有效缓解外植体褐化现象，无需其他防褐化手段，褐化率为9.1-23.6%，同时，活性炭与维生素C协同，更有效刺激植物细胞分裂、改善氧化-还原，有效地促进了烟草外植体快速出芽，最快5d即可诱导出芽。
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公开(公告)号：CN104726530A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510147088.4
申请日：2015-03-31
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明是用于电子烟烟气的生物学效应评价的检测方法，属于电子烟烟气的生物学效应评价技术领域。本发明检测方法首先设定了电子烟的抽吸参数来进行电子烟的抽吸，抽吸口数为100口，使用5mL无血清培养基加入到烟气捕集装置中进行烟气捕集，用含有10%胎牛血清的培养基稀释捕集液至50%烟气浓度、25%烟气浓度、12.5%烟气浓度、6.25%烟气浓度；按常规方法进行MTT试验；最后用细胞存活率表示电子烟烟气对细胞存活的影响。本发明为电子烟烟气的生物学效应评价提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN115896168B
公开(公告)日：2025-02-11
申请号：CN202310004201.8
申请日：2023-01-03
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明公开了一种快速获得栽培烟草烟碱转化株的方法及应用。该快速获得栽培烟草烟碱转化株的方法是利用CRISPR/Cas9系统同时敲除烟草烟碱转化相关的基因，基因为NtNCP1和NtNCP2基因，NtNCP1基因序列为SEQ ID No.1所示，NtNCP2基因序列为SEQ ID No.3所示。本申请利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除同时敲除烟草NtNCP1和NtNCP2基因获得了烟碱含量降低且降烟碱含量增加的编辑素材，这为烟草烟碱转化基因功能研究及烟碱含量调控的烟草新品种定向改良提供遗传材料和理论依据。
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公开(公告)号：CN119080597A
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202411188167.5
申请日：2024-08-28
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: C07C49/553 , C07C45/69 , C11B9/00 , A24B15/34 , A24B3/12
Abstract: 本发明涉及香料技术领域，具体涉及一种新型潜香物、其合成方法及应用。本发明所述新型潜香物具有式I所示结构，本发明利用化学合成的方法，将突厥烯酮与双烯类香料通过Diels‑Alder反应一步反应得到新型潜香物。该新型潜香物能烘托或强化清甜香，可用作香料，同时其在加热或燃烧条件下能释放突厥烯酮，可以作为突厥烯酮前体物。#imgabs0#
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