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公开(公告)号：CN109371057A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811308661.5
申请日：2018-11-05
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种烟草高通量遗传转化的方法，属于植物遗传转化领域。该方法包含烟草无菌苗培育、侵染农杆菌制备、侵染、共培养、选择和分化培养以及生根培养。本发明去掉了费时、费力的烟草叶盘预培养，侵染农杆菌活化、共培养后清洗等步骤，节约了人力和时间成本，降低了转化过程中由于繁锁的人工操作带来的污染风险，同时遗传转化效率进一步提高，适合烟草的规模化遗传转化。
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公开(公告)号：CN113416735B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202110286643.7
申请日：2021-03-17
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种烟草生殖细胞特异高表达基因及应用，核苷酸序列如SEQ I D NO.1所示。本发明通过基因组信息学分析，鉴定获得栽培烟草该基因的编码序列及其启动子序列。通过候选启动子序列元件分析及基因表达谱分析，证实该基因是一个生殖细胞高丰度表达的基因。克隆获得该基因的启动子序列，并以其为启动元件构建生殖细胞特异高丰度表达Cas 9蛋白的基因编辑载体，将载体转入农杆菌，通过叶盘转化法获得转基因烟草植株，通过基因编辑靶位点测序分析发现，转基因烟草植株PDS基因突变效率高，研究结果对于构建高效率的植物基因失活载体并获得突变植株具有重要的指导意义及应用价值。
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公开(公告)号：CN111621508B
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202010526836.0
申请日：2020-06-11
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明公开了一种烟草萜类合成酶基因NtTPS7及其应用，所述烟草萜类合成酶基因NtTPS7的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；本发明首次克隆烟草萜类合成酶基因NtTPS7，并构建得到了克隆载体及敲除载体；通过基因编辑载体构建NtTPS7基因缺失的转基因突变株，从而使烟草叶片颜色由正常的绿色变成浅绿，从而形成花白叶片；因此可以利用基因编辑载体使NtTPS7基因不表达，进行植物品种育种，获得植物花叶的观赏植物品种。
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公开(公告)号：CN113416735A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110286643.7
申请日：2021-03-17
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种烟草生殖细胞特异高表达基因及应用，核苷酸序列如SEQ I D NO.1所示。本发明通过基因组信息学分析，鉴定获得栽培烟草该基因的编码序列及其启动子序列。通过候选启动子序列元件分析及基因表达谱分析，证实该基因是一个生殖细胞高丰度表达的基因。克隆获得该基因的启动子序列，并以其为启动元件构建生殖细胞特异高丰度表达Cas 9蛋白的基因编辑载体，将载体转入农杆菌，通过叶盘转化法获得转基因烟草植株，通过基因编辑靶位点测序分析发现，转基因烟草植株PDS基因突变效率高，研究结果对于构建高效率的植物基因失活载体并获得突变植株具有重要的指导意义及应用价值。
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公开(公告)号：CN108056018A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201711329637.5
申请日：2017-12-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明是用维生素C、聚乙烯基吡咯烷酮及谷胱甘肽防烟草外植体褐化的方法，包括如下步骤：烟草种子的消毒、烟草种子培养、烟草外植体培养、外植体愈伤组织防褐化培养后进行烟草愈伤组织总酚的测定，所述的防褐化培养基为：MS基本培养基中加入防褐添加剂10‑50mg/L的维生素C母液、0.2‑0.5g/L聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、50‑300mg/L的谷胱甘肽母液、30g/L蔗糖、4g/L琼脂，培养基的pH值为5.7，121℃灭菌15min。褐化培养处理后，可以有效缓解褐化现象，改善外植体整体的分化状态。添加维生素C、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和谷胱甘肽在培养基中，具有使用方便、成本低、效果好等优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111621508A
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN202010526836.0
申请日：2020-06-11
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明公开了一种烟草萜类合成酶基因NtTPS7及其应用，所述烟草萜类合成酶基因NtTPS7的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；本发明首次克隆烟草萜类合成酶基因NtTPS7，并构建得到了克隆载体及敲除载体；通过基因编辑载体构建NtTPS7基因缺失的转基因突变株，从而使烟草叶片颜色由正常的绿色变成浅绿，从而形成花白叶片；因此可以利用基因编辑载体使NtTPS7基因不表达，进行植物品种育种，获得植物花叶的观赏植物品种。
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公开(公告)号：CN111560389A
公开(公告)日：2020-08-21
申请号：CN202010526815.9
申请日：2020-06-11
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明公开了一种烟草丝裂原活化蛋白激酶基因NtMAPK8及其应用，所述烟草丝裂原活化蛋白激酶NtMAPK8基因核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示；本发明首次克隆烟草丝裂原活化蛋白激酶基因NtMAPK8，并构建得到了克隆载体及通过基因编辑载体构建NtMAPK8基因缺失的转基因突变株，从而使烟草叶片颜色由正常的绿色变成花白；因此可以利用基因编辑载体使NtMAPK8基因不表达，进行植物品种育种，获得植物花叶的观赏植物品种。
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公开(公告)号：CN111548983A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010527115.1
申请日：2020-06-11
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明公开了一种提高烟草红花大金元遗传转化效率的培养基和方法，所述培养基包括共培养基、选择培养基，共培养基、选择培养基均包括MS基本培养基、NAA、6-BA，所述NAA的终浓度为0.41mg/L，所述NAA与6-BA的浓度比为1:5；所述方法包括如下步骤：烟草红花大金元叶盘的制备；农杆菌的侵染；选择培养；生根培养；该方法中烟草愈伤组织出芽率（分化芽/叶盘）达到127%，生根率（生根苗/分化芽）达到66%，比原有方法(出芽率是62%，生根率是10%)的出芽率提高了约2倍，生根率提高了约6倍，满足规模化遗传转化的需求。
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公开(公告)号：CN109853046A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201811348105.0
申请日：2018-11-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
Abstract: 本发明是一种快速构建CRISPR/Cas9基因编辑载体库的方法，包括以下步骤：设计特异性sgRNA；人工合成寡核苷酸DNA，并分别在上下游引物的5’端加入粘性末端DNA碱基；DNA寡核苷酸双链退火，形成双链sgRNA；利用T4/T7 DNA连接酶将双链sgRNA连接至酶切线性CRISPR/Cas9质粒中；将连接产物转化大肠杆菌提取质粒后得到编辑载体库。本发明利用双链退火原理构建了一种规模化基因编辑载体构建的方法，具有很好的正确率、覆盖度和均一性，可通过一次操作实现成百上千个基因编辑载体的构建，大幅提高载体构建效率，对于各物种基因功能研究和种质资源开发都具有重要意义。
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公开(公告)号：CN107950395A
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201711329630.3
申请日：2017-12-13
Applicant: 云南中烟工业有限责任公司
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明涉及一种基于活性炭和维生素C的烟草外植体防褐化方法，包括如下步骤：步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养；步骤（3），烟草外植体培养；步骤（4），防褐化培养；本发明不仅可以有效缓解外植体褐化现象，无需其他防褐化手段，褐化率为9.1-23.6%，同时，活性炭与维生素C协同，更有效刺激植物细胞分裂、改善氧化-还原，有效地促进了烟草外植体快速出芽，最快5d即可诱导出芽。
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