公开(公告)号：CN112457941A

公开(公告)日：2021-03-09

申请号：CN202011576409.X

申请日：2020-12-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  唐柯 ,  徐岩 ,  李欣宇

IPC: C12G3/024 ,  C12G3/026 ,  C12H1/22 ,  C12R1/865 ,  C12R1/72

Abstract: 本发明公开了一种黑果腺肋花楸果酒及其酿造方法，属于食品工程技术领域。本发明利用混菌发酵黑果腺肋花揪果酒的工艺，包括采用黑果腺肋花楸果实或果渣或果粉为原料，将原料经酶处理、依次接入假丝酵母Candida diversa Z3和酿酒酵母进行一次发酵、补料、发酵后皮渣分离、二次发酵、二次发酵后皮渣再分离、陈酿，得到黑果腺肋花楸果酒。本申请采用特定的果酒制备工艺，不仅改善了黑果肋腺花揪果酒的传统酿造过程中香气单薄的特点，使制作的果酒口感醇厚，果香浓郁，同时很好地降低了该果酒的酸度和涩感，促进了黑果腺肋花揪在食品领域的开发利用。

公开(公告)号：CN104726354A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510163906.X

申请日：2015-04-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  徐岩 ,  梁宏博

IPC: C12N1/19 ,  C12N9/02 ,  C12P7/22 ,  C12R1/865

CPC classification number: C12N9/0006 ,  C12P7/22 ,  C12Y101/01184

Abstract: 利用(S)-羰基还原酶II/E228S的孢子微胶囊酶立体选择性制备(R)-苯乙醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组酿酒酵母（Saccharomyces.cerevisiae）AN120/pRS424-TEFpr-scrII/E228S，保藏编号CCTCC NO：M2015099；及其不对称转化制备(R)-苯乙醇的方法。本发明将(S)-羰基还原酶II的第228位的Glu突变为Ser，构建重组质粒pRS424-TEFpr-scrII/E228S，转化入酿酒酵母获得重组菌株（S.cerevisiae）AN120/pRS424-TEFpr-scrII/E228S，通过后期的诱导培养获得孢子微胶囊酶。该孢子微胶囊酶拓宽了羰基还原酶的底物结合域，解决了羰基还原酶对环境耐受性差、重复利用率低的问题，为高效、低成本、生物合成(R)-苯乙醇的工业应用奠定了基础。

公开(公告)号：CN101717745B

公开(公告)日：2012-05-23

申请号：CN200910263147.9

申请日：2009-12-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  徐岩 ,  耿亚维

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/19

Abstract: 一株羰基还原酶重组菌高效制备(S)-苯基乙二醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一种新型的近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)羰基还原酶基因scr II，Genbank序列号为GQ411433，将scrII插入载体pET28a构建重组质粒pETSCR II，再转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，通过含100μg/mL卡那霉素的LB平板筛选，获得重组菌株E.coliBL21/pETSCRII，保藏编号CCTCC NO：M209290。该重组菌细胞不对称还原5g/L 2-羰基苯乙酮，催化获得(S)-苯基乙二醇，产物的光学纯度为100％，产率达98.1％。本发明为高效制备(S)-苯基乙二醇提供了新型功能基因和有效途径。

公开(公告)号：CN101993828B

公开(公告)日：2012-01-04

申请号：CN201010534231.2

申请日：2010-11-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  徐岩 ,  张波涛 ,  耿亚维

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12P41/00 ,  C12P7/22 ,  C12R1/84

Abstract: 6-磷酸葡萄糖脱氢酶和(S)-羰基还原酶偶联提高(S)-苯基乙二醇转化效率的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组毕赤酵母CGMCC No.4198，及其多批次催化2-羟基苯乙酮，制备(S)-苯基乙二醇的方法。本发明将酿酒酵母6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因与近平滑假丝酵母(S)-羰基还原酶基因同时整合至毕赤酵母基因组中，在5% (w/v) 葡萄糖的参与下，全细胞重复利用10个批次，不对称转化制备(S)-苯基乙二醇的光学纯度和产率始终维持在100%和85%以上。该重组菌株利用多基因共表达提高全细胞转化(S)-苯基乙二醇的批次稳定性，不仅很好地解除了生物转化反应中辅酶再生循环的制约；同时也为工业上多批次、低成本制备(S)-苯基乙二醇提供了一种高效途径。

公开(公告)号：CN101724597B

公开(公告)日：2011-07-27

申请号：CN200910263146.4

申请日：2009-12-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  徐岩 ,  王珊珊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19

Abstract: mRNA二级结构优化提高(R)-羰基还原酶的生物转化效率的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明通过优化(R)-羰基还原酶的mRNA翻译起始区二级结构，并构建了相应的突变重组菌，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET32a-mrcr，保藏编号CCTCC NO：M209289。该突变菌株不仅实现了(R)-羰基还原酶的高效表达，而且有效提高了该酶蛋白活力及其生物转化效率，为高底物浓度下高效制备(R)-苯基乙二醇提供了新型研究思路与途径。

公开(公告)号：CN101985647A

公开(公告)日：2011-03-16

申请号：CN201010534411.0

申请日：2010-11-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐岩 ,  张荣珍 ,  王珊珊

IPC: C12P41/00 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19

Abstract: 辅助底物耦联提高重组菌不对称转化(R)-苯基乙二醇效率的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明理性构建辅助底物耦联体系，实现良性的辅酶再生循环，大幅度提高(R)-苯基乙二醇的制备效率，以mRNA二级结构优化后的重组大肠杆菌BL21/pET32a-mrcr为生物催化剂，保藏编号CCTCCNO：M209289，通过添加不同比例的辅助底物甘油和/或异丙醇，提高底物的溶解性，构建底物耦联再生辅酶循环体系，使反应时间由48h缩短为1.5h，实现了高底物浓度下的(R)-苯基乙二醇的高效转化，这种经济简便的全细胞辅酶再生的方法，为重组菌高效、低成本制备光学纯(R)-苯基乙二醇提供了有效途径，以及手性醇的工业生产奠定了坚实的基础。

公开(公告)号：CN101407780A

公开(公告)日：2009-04-15

申请号：CN200810195613.X

申请日：2008-08-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  徐岩

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/22 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 利用定点突变改变辅酶特异性和立体选择性制备(R)－苯基乙二醇的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明提供了一株重组大肠杆菌BL21/pETSCR6768，保藏编号CCTCC NO：M208079；及其不对称转化制备(R)－苯基乙二醇的方法。本发明将(S)－专一性羰基还原酶的第67位的Ser和68位的His均突变为Asp，构建重组质粒pETSCR6768，转化入大肠杆菌获得重组菌株E.coliBL21/pETSCR6768。该重组菌株使(S)－专一性羰基还原酶的辅酶特异性由NADPH改变为NADH；另一方面改变了产物的空间选择性，由(S)－苯基乙二醇改变为(R)－苯基乙二醇；为高效、低成本制备(R)－苯基乙二醇提供了有效途径，从分子和蛋白水平上认识功能性酶蛋白的立体选择性具有重要的意义。

公开(公告)号：CN119753059A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411664696.8

申请日：2024-11-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  黄润仪

IPC: C12P19/32 ,  C12N9/12 ,  C12N9/88 ,  C12N9/00 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种多酶级联催化泛酸钙合成乙酰辅酶A的方法，属于生物催化工程技术领域。本发明采用泛酸激酶、磷酸泛酰半胱氨酸合成酶‑磷酸泛酰半胱氨酸脱羧酶双功能酶、磷酸泛酰巯基乙胺腺苷酸转移酶、去磷酸辅酶A激酶、丙二酰辅酶A合成酶、丙二酰辅酶A脱羧酶级联高效催化合成乙酰辅酶A的新途径；优选偶联体系，以D‑泛酸钙、L‑半胱氨酸盐酸盐和丙二酸为底物，反应90min合成乙酰辅酶A产量高达8.3g/L。本发明以廉价易得的化合物为前体，构建多酶偶联的重组大肠杆菌，催化合成乙酰辅酶A，大幅度降低了合成成本，为工业绿色高效制备乙酰辅酶A奠定了扎实的基础。

公开(公告)号：CN119506235A

公开(公告)日：2025-02-25

申请号：CN202411489745.9

申请日：2024-10-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  解修兵

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12P33/00 ,  C12P33/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了定向进化提高7β‑羟基类固醇脱氢酶正向酶活高效合成熊去氧胆酸，属于生物催化工程领域。本发明获得正向反应活性及与底物亲和力提高的7β‑羟基类固醇脱氢酶突变体TEAE/F152L/W101N。相比于TEAE，突变体酶正向酶活力提高2.9倍，反向活性降低3.6倍，对7K‑LCA的催化效率kcat/Km提高4.3倍，相比于野生型，突变体TEAE/F152L/W101N的酶活性增加206.23倍，对7K‑LCA的催化效率提高了58.56倍。本发明为定向进化羟基类固醇脱氢酶提供了一种通用的技术平台，为生物高效合成熊去氧胆酸提供了优良突变酶，为实现熊去氧胆酸的高效低成本制备奠定了扎实的研究基础。

公开(公告)号：CN118480524A

公开(公告)日：2024-08-13

申请号：CN202410555964.6

申请日：2024-05-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 张荣珍 ,  席志文

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一株L‑苏氨酸转醛酶突变体及其高效合成氯霉素中间体，属于生物催化工程领域。本发明获得了提高催化能力的L‑苏氨酸转醛酶突变体F70C/N268S。该突变体表现出对L‑threo‑对硝基苯丝氨酸优秀的转化率与非对映体选择性。本发明基于结构分析解析了突变体F70C/N268S催化性能提升的分子机制，为突变酶催化性能提供理论依据。随后在L‑苏氨酸转醛酶催化反应中产生的副产物乙醛，引入副产物消除系统，优化了多酶“一锅法”全细胞催化反应，最终L‑threo‑对硝基苯丝氨酸的产量达到了233.5mM(合计63.3g/L)，de值≥99％，为目前国内外报道的最高水平。