一种氨基酸脱氢酶电极及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN111855775A

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN202010542733.3

    申请日:2020-06-15

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 王世珍 姚光晓

    Abstract: 本发明公开了一种氨基酸脱氢酶电极及其制备方法和应用。本发明涉及生物传感器技术领域,尤其涉及酶电极、酶生物传感器及其制备方法和应用。该氨基酸脱氢酶电极包括基底电极、电子传导体、电子中介体、离子型辅酶和氨基酸脱氢酶,可实现酶分子的有效固定和酶与电极之间的电子转移,提高酶分子催化活性和传感器的灵敏度。本发明的氨基酸脱氢酶电极以具有良好生物相容性的导电高分子聚多巴胺修饰还原氧化石墨烯或碳纳米管作为电极材料,具有制作方法简单、检测灵敏度高、快捷准确、稳定性和重复性好的优点,具有良好的应用前景。

    一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法

    公开(公告)号:CN105647835B

    公开(公告)日:2019-01-08

    申请号:CN201610146280.6

    申请日:2014-08-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法,涉及手性苯丙氨酸。将菌种接入2216L培养基中培养,得发酵液,离心获得细胞,用缓冲液重悬、洗涤,配制成细胞液;所述菌种为南海芽孢杆菌(Bacillus nanhaiensis)DSF‑15A2,保藏中心登记入册编号为CGMCC No.8969;在细胞液中,加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物,再加入辅助底物用于辅酶循环再生,反应后得到含有产物L‑苯丙氨酸的反应液,离心去除沉淀,上清液加入等量的甲醇,震荡混合均匀,离心去除沉淀,上清液稀释后进行测定,苯丙酮酸的浓度用高效液相色谱检测,产物L‑苯丙氨酸的浓度和对映体过量值用高效液相色谱测定。

    一种多酶耦联体系制备手性胺的方法

    公开(公告)号:CN105112468B

    公开(公告)日:2019-01-08

    申请号:CN201510661106.0

    申请日:2015-10-14

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种多酶耦联体系制备手性胺的方法,属于生物催化不对称转化技术领域。本发明构建了胺脱氢酶与甘油脱氢酶、胺脱氢酶与甲酸脱氢酶以及胺脱氢酶与甘油脱氢酶、甲酸脱氢酶的多酶耦联体系,实现手性胺的不对称制备和辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的再生。本发明所提供的多酶耦联体系及其制备手性胺的方法,具有产品转化率高,反应条件温和,操作简单,辅酶可再生等优势,成本低、酶利用率高,适合工业化生产。

    一种包埋胺脱氢酶的聚乙烯亚胺‑氧化钛及其制备方法

    公开(公告)号:CN104404026B

    公开(公告)日:2017-07-18

    申请号:CN201410748389.8

    申请日:2014-12-09

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种包埋胺脱氢酶的聚乙烯亚胺‑氧化钛及其制备方法,属于固定化酶技术领域。该包埋有胺脱氢酶的聚乙烯亚胺(PEI)‑氧化钛固定化颗粒,粒径为100~600nm,其中PEI在固定化过程中具有催化和模板双重作用,即PEI通过分子中的氨基基团与钛前驱体分子之间的静电和氢键作用促进氧化钛的形成,又能通过PEI的结构为模板诱导并调控氧化钛粒子的生成。其制备方法过程包括:配置PEI(直链和支链)及含有胺脱氢酶混合液;配置钛的前驱体二‑(2‑羟基丙酸)二氢氧化二铵合钛(Ti‑BALDH)溶液;将钛的前驱体溶液逐滴加入到PEI及胺脱氢酶的混合液,搅拌生成包埋胺脱氢酶的PEI‑氧化钛固定化颗粒。本发明的优点在于:制备条件温和,工艺简单易行,所得包埋固定化颗粒具有固定化能力强,重复使用稳定性好且能够明显提高胺脱氢酶的温度稳定性。

    一种高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN106191207A

    公开(公告)日:2016-12-07

    申请号:CN201610548837.9

    申请日:2016-07-13

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,涉及酶检测和生物催化剂的高通量筛选。包括菌株培养、细胞破胞、进一步统一多种酶的反应条件(有机溶剂、温度、缓冲液及激活因子)、构建多种有机溶剂体系酶活性高通量检测平台等。通过在粗酶液中加入不同浓度的氯化钠,稳定耐盐、嗜盐酶的结构,使其正确折叠,减少假阴性的结果;并通过加入聚乙烯亚胺,提高氧化还原酶的稳定性,提高筛选效率。运用所建立平台可对大量菌株同时进行多种氧化还原酶耐多种有机溶剂耐受性的检测,有利于最大限度地同时挖掘所考察菌株的应用潜力,获得工业生物催化应用所需的耐有机溶剂的氧化还原酶,并提高筛选效率,减少人力、物力及时间成本的投入。

    一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN102703574B

    公开(公告)日:2015-05-13

    申请号:CN201210190270.4

    申请日:2012-06-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,涉及一种氧化还原酶。提供一种效率较高、可增大发现有实际应用价值酶的概率,以克服现有的筛选手段实用性不高、资源浪费较大、效率较低等缺陷的筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,所述辅酶依赖型氧化还原酶包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖型氧化还原酶。建立NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶库;对所述氧化还原酶,依据其反应条件进行分类;对每一类氧化还原酶通过实验统一其反应条件,建立对应的氧化还原酶系的检测平台;建立菌株库;利用检测平台对菌株库进行高通量酶活检测,筛选得NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶。

    一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法

    公开(公告)号:CN103224963B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201310198839.6

    申请日:2013-05-24

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 王世珍 方柏山

    Abstract: 一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法,涉及一种手性胺。将菌种接入216L培养基中培养,再将培养后获得的发酵液离心获得细胞,用缓冲液重悬、洗涤,配制成细胞液;在得到的细胞液中,加入酮作为底物,再加入氨基供体和辅助底物,用于辅酶循环再生,利用细胞催化不对称还原胺化得到产物手性胺。从海洋微生物筛选获得含有依赖NADH的胺脱氢酶的不同以往报道的新菌株,优化该菌株全细胞催化酮不对称还原胺化制备手性胺的反应体系和反应条件。所获产物手性胺的光学纯度达到90%以上,收率达70%以上。操作方便,具有产品光学纯度高、收率高等优点,设备简单,在生物催化制备手性胺领域具有较好的工业应用前景。

    一种包埋胺脱氢酶的聚乙烯亚胺-氧化钛及其制备方法

    公开(公告)号:CN104404026A

    公开(公告)日:2015-03-11

    申请号:CN201410748389.8

    申请日:2014-12-09

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种包埋胺脱氢酶的聚乙烯亚胺-氧化钛及其制备方法,属于固定化酶技术领域。该包埋有胺脱氢酶的聚乙烯亚胺(PEI)-氧化钛固定化颗粒,粒径为100~600nm,其中PEI在固定化过程中具有催化和模板双重作用,即PEI通过分子中的氨基基团与钛前驱体分子之间的静电和氢键作用促进氧化钛的形成,又能通过PEI的结构为模板诱导并调控氧化钛粒子的生成。其制备方法过程包括:配置PEI(直链和支链)及含有胺脱氢酶混合液;配置钛的前驱体二-(2-羟基丙酸)二氢氧化二铵合钛(Ti-BALDH)溶液;将钛的前驱体溶液逐滴加入到PEI及胺脱氢酶的混合液,搅拌生成包埋胺脱氢酶的PEI-氧化钛固定化颗粒。本发明的优点在于:制备条件温和,工艺简单易行,所得包埋固定化颗粒具有固定化能力强,重复使用稳定性好且能够明显提高胺脱氢酶的温度稳定性。

    一种发酵生产1,3-丙二醇的固定化纤维床反应器

    公开(公告)号:CN104130934A

    公开(公告)日:2014-11-05

    申请号:CN201410392120.0

    申请日:2014-08-11

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12M21/16 C12M25/18 C12M29/18 C12M41/26

    Abstract: 一种发酵生产1,3-丙二醇的固定化纤维床反应器,涉及1,3-丙二醇。设有反应器、发酵罐、pH自动控制装置;pH自动控制装置设有发酵罐pH探头、反应器pH探头、发酵罐pH检测器、反应器pH检测器、碱液蠕动泵、碱液瓶、空气过滤器,第1碱液瓶的碱液出口经第1碱液蠕动泵接发酵罐;发酵罐pH探头接发酵罐,其输出端接发酵罐pH检测器,发酵罐空气过滤器出口接发酵罐;发酵罐出口经发酵液蠕动泵接反应器;第2碱液瓶出口经蠕动泵接反应器,第2碱液瓶上设有空气过滤器;反应器pH探头接反应器,反应器内填充纤维材料,反应器pH探头与反应器pH检测器连接,反应器内底部设筛板;反应器上设有尾气出口,反应器接产物收集装置。

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