一种枯草芽孢杆菌全细胞转化苯丙氨酸生产苯乳酸的方法

    公开(公告)号:CN109517778B

    公开(公告)日:2021-03-02

    申请号:CN201811562187.9

    申请日:2018-12-20

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 王淼 刘龙 薛技科

    Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌全细胞转化苯丙氨酸生产苯乳酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明成功实现了苯丙氨酸脱氢酶、乳酸脱氢酶在枯草芽孢杆菌中共表达的构建。全细胞转化L‑苯丙氨酸可生产10.0g/L苯乳酸,转化率为40%。此全细胞转化体系的建立,解决了化学法合成苯乳酸的步骤繁琐、得率低、污染环境等问题,为后续工业化生产奠定了一定的理论基础。

    高效合成α-熊果苷的基因工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN112375724A

    公开(公告)日:2021-02-19

    申请号:CN202011298679.9

    申请日:2020-11-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高效合成α‑熊果苷的基因工程菌及其构建方法与应用,属于基因工程技术领域。本发明利用表达蔗糖磷酸化酶(SmSP)的重组枯草芽孢杆菌全细胞催化高效生产α‑熊果苷,为α‑熊果苷的生产提供了新的思路和方法。本发明通过分子对接以及定点饱和突变筛选到了SmSP酶活提高的蛋白突变体SmSPI336L,通过增加SmSPI336L在基因组上的拷贝数的方式,提高了SmSP的蛋白表达量,并通过优化BS‑3SmSPI336L菌株的催化条件,大幅提高了α‑熊果苷的产量。当底物HQ的浓度为50g/L,蔗糖浓度为310.9g/L,菌体浓度OD600=40,催化体系在摇瓶中30℃、220rpm催化20h时α‑熊果苷的产量达到115.8g/L,底物HQ的摩尔转化率为93.6%。

    一种提高枯草芽孢杆菌卵清蛋白表达量的方法

    公开(公告)号:CN111875699A

    公开(公告)日:2020-11-03

    申请号:CN202010635355.3

    申请日:2020-07-03

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌卵清蛋白表达量的方法,属于基因工程领域。本发明通过提高枯草芽孢杆菌的比生长速率来提高枯草芽孢杆菌卵清蛋白表达量。本发明以野生型168为出发菌株,通过使用生长相关基因的敲除、适应性进化(Adaptive Laboratory Evolution,ALE)以及两者结合的方法得到比生长速率提高的多个重组菌株,可以通过提高枯草芽孢杆菌比生长速率来提高枯草芽孢杆菌卵清蛋白表达量,为提高枯草芽孢杆菌卵清蛋白表达量提供了一种新的思路与方法。

    应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK-7的方法

    公开(公告)号:CN110157749B

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN201910490611.1

    申请日:2019-06-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK‑7的方法,属于遗传工程领域。本发明通过对磷酸激酶KinA截短突变,并用组成型启动子Pveg表达,使细胞能够在培养基营养丰富的情况下产生芽孢信号。应用本发明方法得到受Phr60‑Rap60群体响应调控的Spo0A系统,通过对MK‑7合成途径的动态调控,实现了MK‑7的高效合成,不需要额外诱导剂,实现了目标产物高效合成与细胞生长之间的动态平衡。最终得到的枯草芽孢杆菌重组菌BS19、BS20摇瓶发酵生产MK‑7的产量分别高达170mg/L、360mg/L,是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168的17.89、37.89倍。

    一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法

    公开(公告)号:CN107760643B

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN201711126127.8

    申请日:2017-11-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法,属于基因工程技术领域。本发明是以重组枯草芽孢杆菌(SGN6‑PxylA‑glmS‑P43‑GNA1)作为出发菌株,通过同源重组将glmS核酶分别整合至glmM基因和pfkA基因的rbs序列与其启动子序列中间,利用glmS核酶突变体具有延长mRNA的稳定性,将其整合至pgi基因的rbs序列与启动子序列之间,使重组表达后的菌株乙酰氨基葡萄糖的产量达到11.79~20.05g/L,为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。

    一种高产L-色氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法

    公开(公告)号:CN109486737B

    公开(公告)日:2020-09-04

    申请号:CN201811465696.X

    申请日:2018-12-03

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高产L‑色氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法,属于遗传工程技术领域。本发明是以大肠杆菌CICC 10303作为出发菌株,采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,替换莽草酸激酶编码基因aroK启动子为强启动子T7;替换预苯酸脱氢酶编码基因pheA的启动子为弱启动子tac;敲除色氨酸转运体编码基因mtr,阻止发酵过程色氨酸转运回胞内。最终得到积累L‑色氨酸的大肠杆菌基因工程菌,产量达到36g/L,为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产L‑色氨酸奠定了基础。

    一种提高甲壳素酶表达量的方法

    公开(公告)号:CN109097379B

    公开(公告)日:2020-08-04

    申请号:CN201811068554.X

    申请日:2018-09-13

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高甲壳素酶表达量的方法,属于酶工程以及微生物工程技术领域。本发明的方法为先将信号肽NprB、AmyE、AprE、BglS、Bpr、Epr、LipA、Vpr、YweA或YclQ的基因融合至切除了自身信号肽基因的甲壳素酶基因N端,然后将融合有外源信号肽基因的甲壳素酶基因在表达宿主中进行表达,以提高甲壳素酶的表达量;将利用本发明的方法得到的重组菌发酵12h,可使得发酵上清液中的甲壳素酶酶活提高至20.62U/mL(胞外酶活),是野生型菌株发酵的将近15倍。

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