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公开(公告)号：CN114107270B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111485153.6
申请日：2021-12-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体E88R的比酶活相对野生型提高了2.1倍，比酶活达481±3.7U/mg。突变体E88R在50℃处理30分钟仍有59％残留酶活性，在pH 7.0和pH 8.0条件下，残余酶活分别为88％和82％。相比野生型酶，该突变体酶E88R的热稳定性与pH稳定性都有很大的提高，有利于以后的工业生产。在pH 7.5条件下，突变体E88R比酶活达到199±2.1U/mg，比野生型高1.9倍。以2.5M马来酸作为底物，全细胞催化制备L‑丙氨酸，生产速率达35.66g/(L·h)，比野生型提高1.68倍。
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公开(公告)号：CN114317510B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202210006581.4
申请日：2022-01-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的马来酸顺反异构酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的温度稳定性相比野生酶有了较大的提高，同时该突变体具有更好的pH稳定性。将构建得到的马来酸顺反异构酶突变体与天冬氨酸酶AspA在大肠杆菌中偶联表达，并以马来酸为底物生产L‑天冬氨酸，转化率可达94％以上，具有广阔的工业生产应用前景。
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公开(公告)号：CN112553236B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011449745.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于异源群体感应的高效表达系统，属于基因工程技术领域。本发明通过将金黄色葡萄球菌的agr群体感应系统中的agrA、agrB、agrC和agrD基因异源构建至枯草芽孢杆菌168基因组，将P3启动子克隆至穿梭载体，进而构建相配套的宿主和表达质粒。使用绿色荧光蛋白sfGFP作为报告基因，证明该系统可以高效表达外源蛋白，且不需要额外添加诱导剂。分别对P3启动子在RepA、RepB和RepF复制类型质粒上的蛋白表达水平进行检测，表明其与强组成型启动子P43和PylbP相比，在RepA和RepF复制类型质粒上具有超高的活性。
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公开(公告)号：CN112553235B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011449022.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种甘油诱导表达系统及在纳豆激酶生产中的应用，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明通过将PglpD与抗终止子GlpP共同构建至枯草芽孢杆菌高拷贝质粒上，使菌体的生长和蛋白的表达分开。在发酵初期，使菌体充分利用葡萄糖等优先利用的碳源完成生长和高效积累生物量的过程；直至葡萄糖耗尽，甘油自动诱导开始之后，蛋白得到高效表达。本发明用绿色荧光蛋白和纳豆激酶验证该表达系统的调控性能，该表达系统可广泛应用于对宿主菌压力较大的蛋白和代谢产物的生产上。
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公开(公告)号：CN112481265B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN202011451933.4
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了枯草芽孢杆菌人工终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对不同的终止子的活性进行表征，接下来使用不同终止子测定平台对终止子的终止次效率进行测定，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。将一系列不同终止子应用于纳豆激酶和普鲁兰酶重组蛋白表达中，结果表明，这些终止子有助于提高蛋白的酶活和蛋白表达量的提升，这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114317502A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111478383.X
申请日：2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的纳豆激酶突变体，属于蛋白质工程领域。本发明筛选得到三种纳豆激酶突变体，分别是突变体M2(S62AN181DY217KN218SN259P)，突变体M3(P57CA92C)以及突变体M4(S62AP57CA92CN181DY217KN218SN259P)。其中突变体M4在55℃与65℃下半衰期分别较野生型提升了20.7倍与12.9倍，这是目前已有的报道中关于纳豆激酶热稳定性最优的突变体，同时比酶活也较野生型提升了2.1倍。本发明实现了在提升纳豆激酶热稳定性的同时保持其催化活性，以突破“稳定性活性的权衡”，为纳豆激酶工业化应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114277045A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111466694.4
申请日：2021-12-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一段AmiC‑AmiR突变体的氨基酸基序在检测酰胺类化合物中的应用。本发明通过对RBS进行优化、并将AmiC第83位取代为组氨酸，从而实现了此传感器对于酰胺类物质的响应，并且能检测到摩尔级别的含量，响应范围在0～10mM之间。从而具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113817659A
公开(公告)日：2021-12-21
申请号：CN202111076165.3
申请日：2021-09-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/64 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/31 , C12P13/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌发酵制备β‑丙氨酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种工程菌株，通过游离型表达质粒分别过表达panD基因、aspA基因、大肠杆菌来源的ppc基因、gldA基因和dhaKLM基因，敲除了染色体上的lacI基因、乙醛羧酸循环抑制子iclR和富马酸消耗途径的fumA和fumC基因获得高效生产β‑丙氨酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的甘油为底物，发酵生成附加值更高的β‑丙氨酸，发酵50h，β‑丙氨酸产量可达37.9g/L，为工业绿色、高效生产β‑丙氨酸提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN111269926B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201911414867.0
申请日：2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种钴离子诱导型蛋白表达系统及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过将响应钴离子的阻遏蛋白RcnR及其操纵序列rcnO与来源于枯草芽孢杆菌的强启动子Pveg构建在一起，得到了钴离子诱导型高效基因表达系统。当利用该系统表达腈水合酶时，以500μM钴离子作为诱导剂，酶活最高达到106.2±4.6U/mL，接近使用IPTG诱导系统的水平(121.4±4.0U/mL)。在利用该钴离子诱导型系统表达腈水合酶过程中，钴离子同时作为腈水合酶的诱导剂和金属配体，不需要额外添加化学诱导剂，降低了生产成本，简化了生产工艺。
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公开(公告)号：CN109652417B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201811542085.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P21/00 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种构建高效枯草芽孢杆菌启动子的方法，属于基因工程技术领域。本发明将不同sigma亚基识别的天然启动子串联得到一些双串联、三串联启动子，并在启动子串联的基础之上优化了启动子核心区之间的间隔序列长度进一步提升了启动子的活性，最后将启动子进行不同的RBS设计，不仅验证了该策略可以提升启动子和其他基因表达调控元件之间的兼容性，也对外源基因的表达进行了可控的调节。通过本发明提供的方法，我们可以用简便的启动子设计和改造方法获得活性更高、设计性和兼容性更强的启动子。该方法简单、易于实现，在构建外源蛋白高效表达系统和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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