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公开(公告)号：CN112553235A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011449022.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种甘油诱导表达系统及在纳豆激酶生产中的应用，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明通过将PglpD与抗终止子GlpP共同构建至枯草芽孢杆菌高拷贝质粒上，使菌体的生长和蛋白的表达分开。在发酵初期，使菌体充分利用葡萄糖等优先利用的碳源完成生长和高效积累生物量的过程；直至葡萄糖耗尽，甘油自动诱导开始之后，蛋白得到高效表达。本发明用绿色荧光蛋白和纳豆激酶验证该表达系统的调控性能，该表达系统可广泛应用于对宿主菌压力较大的蛋白和代谢产物的生产上。
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公开(公告)号：CN109486847B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN112322606A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011307426.3
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。
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公开(公告)号：CN110804602B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201911127316.6
申请日：2019-11-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体N35D、A179E，pH 7.0条件下催化酶活性分别提高238％、244％。pH 4.5条件下处理12h酶活分别剩余83.9％、85.5％，相比对照野生型酶残余酶活24.8％，突变体酸稳定性有明显提高。因此，本发明提供的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶突变体N35D、A179E具有较好的酶学性质。
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公开(公告)号：CN109055346B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201811131112.5
申请日：2018-09-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于赤拟谷盗的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶进行定点突变，获得K49R，G369A和K221R三个酶突变体，将突变体重组质粒转化至大肠杆菌BL21中，表达分离纯化后，催化底物L‑天冬氨酸生成β‑丙氨酸。在50℃处理温度下，K49R可以使热稳定性相较于野生酶提高14％，G369A可以使热稳定性相较于野生酶提高20％，K221R可以使热稳定性相较于野生酶提高23％。其中，K221R还可以使比酶活达到约320U/g，相较于野生酶酶活提高了23％。这一发现对于工业化制备β‑丙氨酸具有重要的研究价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111718934A
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN202010606720.8
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种新终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对单终止子的活性进行表征，通过不同活性的终止子进行组合串联的方式，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111690649A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010606504.3
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种新终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对单终止子的活性进行表征，通过不同活性的终止子进行组合串联的方式，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111607623A
公开(公告)日：2020-09-01
申请号：CN202010479232.5
申请日：2020-05-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌制备α-酮异戊酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种偶联表达乙酰乳酸合成酶、乙酰乳酸异构还原酶和二羟基酸脱水酶的重组菌株，并对该宿主菌株进行改造优化，获得能够发酵法高效生产α-酮异戊酸的重组菌。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物，发酵生成附加值更高的α-酮异戊酸，发酵36h，α-酮异戊酸产量可达22.91g/L，葡萄糖转化率达80％。
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公开(公告)号：CN111019964A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911421812.2
申请日：2019-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造钴内稳态减少腈水合酶生产中钴用量的方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明所述方法中使用的Co2+内稳态系统是通过引入外排蛋白RcnA和摄取蛋白NiCoT构建而成的。在人工Co2+内稳态的帮助下，大肠杆菌对于高浓度的Co2+耐受性增强，同时使用型诱导系统表达外源基因时，蛋白可被更低浓度的Co2+有效诱导。将该系统应用于腈水合酶生产时，达到最大酶活的Co2+使用量从500μM降低至300μM，在腈水合酶的酶活和产量不变的基础上，可以显著降低Co2+的使用量，降低了生产成本，减少了生产过程中对环境的潜在污染。
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公开(公告)号：CN107937372B
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201711376850.1
申请日：2017-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种耐酸性提高的纳豆激酶，属于蛋白质工程。本发明得到的纳豆激酶Q59E‑Y217K‑N218D和Y217K，在酸性条件下，Q59E‑Y217K‑N218D和Y217K的稳定性较野生酶有大幅度提高。本发明提供的纳豆激酶突变体Q59E‑Y217K‑N218D和Y217K能更好的应对胃道极端酸性环境，提高了纳豆激酶作为治疗心脑血管疾病口服药物的应用价值。
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