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公开(公告)号：CN119144631B
公开(公告)日：2025-02-21
申请号：CN202411649698.X
申请日：2024-11-19
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种提高蛋白表达量的重组表达载体及其应用。包含CMV‑CMV双启动子，所述CMV‑CMV双启动子由两个序列相同的CMV启动子同向相连组成；其中CMV‑CMV双启动子共同启动下游目的基因表达，CMV‑CMV双启动子之间的间隔为0‑60bp。本发明制备的含双CMV启动子的重组表达载体(启动子串联共用表达框)，和原始载体相比（仅有一个CMV启动子），表达量提高量43%。在启动子串联共用表达框的情况下，启动子之间的间隔对表达量具有一定影响。本发明通过设计不同间隔（双CMV启动子之间）的表达载体，发现了在串联启动子间隔0bp和40bp表达量出现峰值，启动效率最高。为进一步转染驯化得到高表达目的蛋白的重组细胞提供了方向。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118546941A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202411017335.4
申请日：2024-07-29
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
IPC: C12N15/12 , C07K14/475 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明属于生物领域，具体涉及一种RSPO1蛋白的表达载体及其应用。本发明构建一种含有细胞表达强启动子的质粒，通过筛选获得高效、稳定表达293细胞株，同时优化下游纯化工艺，从而实现Rspo1重组蛋白的量产。本发明技术方案得到的293稳转表达细胞系，可以在无血清培养基中悬浮培养生长表达生产细胞因子，消除血清中成分对产品平直的影响。同时，生产体积可以放大到2L，10L、甚至300L，破除了孔板培养体系小的局限。另外，生产中省去质粒抽提和转染的操作，可以降低因子表达的批间差异，为大量表达提供了基础。
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公开(公告)号：CN118516313A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410980731.0
申请日：2024-07-22
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及遗传学技术领域，具体涉及一种BAX基因敲除的293F细胞株及其应用。本发明公开了一种敲除BAX基因的293F细胞株，采用CRISPR‑Cas9技术，对野生型293F细胞进行基因敲除：利用同源重组技术，将靶点序列导入到CRISPR‑Cas9敲除载体中，根据选定的敲除靶点设计供基因组修复的同源重组片段并转染，经过单克隆培养后，最终得到BAX敲除细胞株。得到的BAX敲除细胞株进行悬浮驯化后传代，对传代后的细胞株进行测试，结果显示其抗体的表达量显著提升。
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公开(公告)号：CN119736306A
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202510215567.9
申请日：2025-02-26
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明属于生物领域，具体涉及一种Noggin蛋白的表达载体及其应用。本发明构建一种含有细胞表达强启动子的质粒，通过筛选获得高效、稳定表达293细胞株，同时优化下游纯化工艺，从而实现Noggin重组蛋白的量产。本发明技术方案得到的293稳转表达细胞系，可以在无血清培养基中悬浮培养生长表达生产细胞因子，消除血清中成分对产品平直的影响。同时，生产体积可以放大到2L，10L、甚至300L，破除了孔板培养体系小的局限。另外，生产中省去质粒抽提和转染的操作，可以降低了因子表达的批间差异，为大量表达提供了基础。
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公开(公告)号：CN119144631A
公开(公告)日：2024-12-17
申请号：CN202411649698.X
申请日：2024-11-19
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种提高蛋白表达量的重组表达载体及其应用。包含CMV‑CMV双启动子，所述CMV‑CMV双启动子由两个序列相同的CMV启动子同向相连组成；其中CMV‑CMV双启动子共同启动下游目的基因表达，CMV‑CMV双启动子之间的间隔为0‑60bp。本发明制备的含双CMV启动子的重组表达载体(启动子串联共用表达框)，和原始载体相比（仅有一个CMV启动子），表达量提高量43%。在启动子串联共用表达框的情况下，启动子之间的间隔对表达量具有一定影响。本发明通过设计不同间隔（双CMV启动子之间）的表达载体，发现了在串联启动子间隔0bp和40bp表达量出现峰值，启动效率最高。为进一步转染驯化得到高表达目的蛋白的重组细胞提供了方向。
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公开(公告)号：CN118516313B
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202410980731.0
申请日：2024-07-22
Applicant: 上海奥浦迈生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明属于分子生物学及遗传学技术领域，具体涉及一种BAX基因敲除的293F细胞株及其应用。本发明公开了一种敲除BAX基因的293F细胞株，采用CRISPR‑Cas9技术，对野生型293F细胞进行基因敲除：利用同源重组技术，将靶点序列导入到CRISPR‑Cas9敲除载体中，根据选定的敲除靶点设计供基因组修复的同源重组片段并转染，经过单克隆培养后，最终得到BAX敲除细胞株。得到的BAX敲除细胞株进行悬浮驯化后传代，对传代后的细胞株进行测试，结果显示其抗体的表达量显著提升。
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