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公开(公告)号：CN110357948B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN201910048712.3
申请日：2019-01-18
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明属于蛋白质技术领域，公开了一种MdrP突变体的基因、氨基酸、蛋白功能及药物积累活性检测，在含有阳离子(Na+、K+)的Buffer中加入CCCP移除跨膜H+梯度只保留跨膜阳离子梯度驱动蛋白转运，或在buffer中分别加入Monensin或Nigericin移除阳离子梯度只保留跨膜H+梯度来驱动蛋白转运，实现不同驱动作用之间的相对定量对比。本发明明确了MdrP蛋白高度保守氨基酸位点的重要功能，证明了MdrP蛋白是一个H+和Na+驱动的药物外排蛋白；N146是H+结合位点，D223、Q242是Na+、H+竞争结合位点，或可以成为对MFS家族抗药蛋白理解的有利理论支撑。
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公开(公告)号：CN110357948A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910048712.3
申请日：2019-01-18
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明属于蛋白质技术领域，公开了一种MdrP突变体的基因、氨基酸、蛋白功能及药物积累活性检测，在含有阳离子(Na+、K+)的Buffer中加入CCCP移除跨膜H+梯度只保留跨膜阳离子梯度驱动蛋白转运，或在buffer中分别加入Monensin或Nigericin移除阳离子梯度只保留跨膜H+梯度来驱动蛋白转运，实现不同驱动作用之间的相对定量对比。本发明明确了MdrP蛋白高度保守氨基酸位点的重要功能，证明了MdrP蛋白是一个H+和Na+驱动的药物外排蛋白；N146是H+结合位点，D223、Q242是Na+、H+竞争结合位点，或可以成为对MFS家族抗药蛋白理解的有利理论支撑。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108330141A
公开(公告)日：2018-07-27
申请号：CN201810091103.1
申请日：2018-01-30
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，公开了一种编码蛋白Pm_MF的鉴定方法和应用，蛋白Pm_MF的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；蛋白基因Pm_mf为一个1272bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1；鉴定方法包括筛选出含有耐盐碱基因的片段；构建含有Pm_mf基因的原核表达载体等等。本发明的蛋白可用于构建高效的耐盐碱工程菌或抗逆型作物等，多种药物抗性蛋白功能可用作基因工程载体筛选标记，特别是耐盐碱能力和药物抗性筛选标记的双重功能在构建耐盐或耐碱胁迫的基因工程菌株和植株方面具有重大价值。
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公开(公告)号：CN109628474B
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN201910048713.8
申请日：2019-01-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/31 , C07K14/195 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法，耐盐碱基因mceT，含一个921bp的完整开放阅读框ORF；从德昌游动球菌中获得含有耐盐碱相关的基因片段；构建含有游动球菌耐盐碱基因mceT基因的原核表达载体；通过化转异源宿主将携带基因mceT的质粒电击转化的方法导入至KNabc宿主中，对基因mceT生理功能及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明能够抑制一株Zn2+敏感型大肠杆菌突变株在含0.75mM ZnCl2的培养基中的生长。并且构建了MceT蛋白的多种突变体，使其只能行使耐盐碱或促进Zn2+向细胞内扩散的其中一种功能。
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公开(公告)号：CN109880834B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201811005998.9
申请日：2018-08-30
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法，喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB，含一个663bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；鉴定方法包括：筛选含有耐盐碱相关的基因片段，构建含有yigB基因的原核表达载体；通过化转异源宿主Escherichia coli KNabc，将基因yigB导入KNabc宿主中，对基因yigB生理功能、Na+耐受能力、脱卤酶活性及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明所提出的yigB基因对盐碱地土壤改良具有重要意义，可用于构建高效耐盐碱工程菌株、开发微生物肥料和提高植物耐盐碱性的转基因植物领域的研究。
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公开(公告)号：CN109880834A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201811005998.9
申请日：2018-08-30
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法，喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB，含一个663bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；鉴定方法包括：筛选含有耐盐碱相关的基因片段，构建含有yigB基因的原核表达载体；通过化转异源宿主Escherichia coli KNabc，将基因yigB导入KNabc宿主中，对基因yigB生理功能、Na+耐受能力、脱卤酶活性及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明所提出的yigB基因对盐碱地土壤改良具有重要意义，可用于构建高效耐盐碱工程菌株、开发微生物肥料和提高植物耐盐碱性的转基因植物领域的研究。
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公开(公告)号：CN109628474A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910048713.8
申请日：2019-01-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/31 , C07K14/195 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
CPC classification number: C07K14/195 , C12N15/70
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种游动球菌耐盐碱基因mceT及其鉴定方法，耐盐碱基因mceT，含一个921bp的完整开放阅读框ORF；从德昌游动球菌中获得含有耐盐碱相关的基因片段；构建含有游动球菌耐盐碱基因mceT基因的原核表达载体；通过化转异源宿主将携带基因mceT的质粒电击转化的方法导入至KNabc宿主中，对基因mceT生理功能及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明能够抑制一株Zn2+敏感型大肠杆菌突变株在含0.75mM ZnCl2的培养基中的生长。并且构建了MceT蛋白的多种突变体，使其只能行使耐盐碱或促进Zn2+向细胞内扩散的其中一种功能。
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