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发明公开
基于CRISPR/Cas9系统靶向敲除KHV基因的敲除载体构建方法及其crRNA原件无效

公开(公告)号：CN104762321A

公开(公告)日：2015-07-08

申请号：CN201510194406.2

申请日：2015-04-22

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 赵翊丞 , 于泽 , 王鶴鸣 , 张紫茜 , 张童童 , 滕春波

IPC: C12N15/85 , C12N15/113

Abstract: 基于CRISPR/Cas9系统靶向敲除KHV基因的敲除载体构建方法及其crRNA原件，涉及一种敲除载体构建方法及其crRNA原件。是要解决现有方法抑制KHVD不足的问题。方法：一、合成crRNA-TK和crRNA-DP引物，沸水处理，退火，得到两个DNA双链退火产物；二、制备pX330-puro载体；三、对pX330-puro载体进行酶切，进行去磷反应，回收线性化的载体；四、对线性化载体与两个退火产物连接，得连接产物；五、将连接产物转入感受态细胞内，提取重组质粒DNA，命名为pX330-puro TK或pX330-puro DP重组载体。本发明基于定向敲除KHV关键基因，靶向精确性高，胞内病毒抑制效果明显。

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