公开(公告)号：CN105974124A

公开(公告)日：2016-09-28

申请号：CN201610332542.8

申请日：2016-05-19

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  王莉 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  罗卉 ,  李懿莎 ,  贺维佳 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  陈广文 ,  肖献忠

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/564 ,  C12N15/85 ,  C12N9/14

CPC classification number: G01N33/6854 ,  C12N9/14 ,  C12N15/85 ,  C12N2800/107 ,  C12Y306/04013 ,  G01N33/564 ,  G01N2800/10 ,  G01N2800/24

Abstract: 本申请公开了一种检测炎症性肌病特异性自身抗体MDA5的非放射标记免疫沉淀方法，本发明通过提供下述方法：构建含MDA5C末端(447‑1025aa)以及N端带有Myc标签的质粒pCMV‑myc‑MDA5C，瞬时转染HEK293细胞，炎症性肌病患者的待测血清与过表达MDA5C末端的HEK293细胞裂解液进行免疫沉淀，然后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用c‑myc抗体检测沉淀的MDA5C末端，解决了目前国内还没有商业化的检测MDA5抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条的问题，以及自行包被MDA5抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法的安全性等问题。

公开(公告)号：CN106596975A

公开(公告)日：2017-04-26

申请号：CN201611170324.5

申请日：2016-12-16

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  黄莉 ,  王莉 ,  罗卉 ,  李懿莎 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  王国春 ,  刘瑛 ,  贺维佳 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  陈广文 ,  肖献忠

IPC: G01N33/68 ,  C12N15/85 ,  C12N9/04

CPC classification number: G01N33/6893 ,  C12N9/0006 ,  C12N15/85 ,  C12N2800/107 ,  C12Y101/01034 ,  G01N2800/24

Abstract: 本申请公开了炎症性肌病HMGCR自身抗体的非放射性检测方法与应用，包括：炎症性肌病HMGCR自身抗体的非放射标记免疫沉淀检测方法和免疫印迹检测方法，用于检测特发性炎症性肌病患者的抗HMGCR自身抗体；其中，炎症性肌病HMGCR自身抗体的非放射标记免疫沉淀检测方法包括：用Protein G磁珠分别与20ul HMGCR抗体阳性的炎症性肌病患者血清或健康对照血清进行结合，继而与过表达HMGCR C端的细胞裂解液孵育进行抗原吸附，洗脱后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用c‑myc抗体进行检测；炎症性肌病HMGCR自身抗体的免疫印迹检测方法包括：将过表达HMGCR C端的HEK293细胞裂解液进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用HMGCR抗体阳性的患者血清作为一抗，用兔抗人IgG H&L作为二抗进行检测；解决目前国内还没有商业化的检测HMGCR抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条，以及自行包被HMGCR抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法安全性问题。

公开(公告)号：CN106596974A

公开(公告)日：2017-04-26

申请号：CN201611170323.0

申请日：2016-12-16

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  王莉 ,  黄莉 ,  罗卉 ,  李懿莎 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  王国春 ,  刘瑛 ,  贺维佳 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  陈广文 ,  肖献忠

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/564

CPC classification number: G01N33/6854 ,  G01N33/564 ,  G01N2800/10 ,  G01N2800/24

Abstract: 本申请公开了炎症性肌病SAE1自身抗体的非放射性检测方法与应用，具体地包括：炎症性肌病SAE1自身抗体的非放射标记免疫沉淀检测方法和免疫印迹检测方法，用于检测特发性炎症性肌病患者的抗SAE1自身抗体；非放射标记免疫沉淀检测方法包括：用Protein G磁珠分别与SAE1抗体阳性的炎症性肌病患者血清或健康对照血清进行结合，然后与过表达SAE1的HEK293细胞裂解液孵育进行抗原吸附，洗脱后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用Flag抗体进行检测；免疫印迹检测方法包括：将过表达SAE1的HEK293细胞裂解液进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用SAE1抗体阳性血清作为一抗，用兔抗人IgG H&L作为二抗进行检测；解决了目前国内没有商业化的检测SAE1抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条问题，以及自行包被SAE1抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法安全性问题。

公开(公告)号：CN106443017A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610886900.X

申请日：2016-10-11

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  王莉 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  罗卉 ,  刘瑛 ,  王国春 ,  李懿莎 ,  贺维佳 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  陈广文 ,  肖献忠

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/564 ,  C12N15/85

CPC classification number: G01N33/6854 ,  C07K14/47 ,  C07K14/4748 ,  C12N15/85 ,  C12N2800/107 ,  G01N33/564 ,  G01N2800/10 ,  G01N2800/24

Abstract: 本申请公开了检测炎症性肌病NXP2自身抗体的非放射标记免疫沉淀方法与应用，通过构建含NXP2 N端(1-500aa)或NXP2 C端(400-939aa)并且带有Myc标签的质粒pCMV-myc-NXP2N或pCMV-myc-NXP2C，瞬时转染HEK293细胞，NXP2自身抗体阳性的炎症性肌病患者血清与过表达NXP2 N端或NXP2 C端的HEK293细胞裂解液进行免疫沉淀，发现NXP2 N端或NXP2 C端均被NXP2自身抗体沉淀；将炎症性肌病患者的待测血清与过表达NXP2 C端的HEK293细胞裂解液进行免疫沉淀，然后进行SDS-PAGE凝胶电泳，用c-myc抗体检测沉淀的NXP2 C端，确定炎症性肌病患者血清中是否具有NXP2自身抗体，解决目前国内还没有商业化的检测NXP2抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条的问题，以及自行包被NXP2抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法的安全性等问题。

公开(公告)号：CN107228945A

公开(公告)日：2017-10-03

申请号：CN201710418559.X

申请日：2017-06-06

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  王莉 ,  黄莉 ,  刘洋腾宇 ,  刘艳娟 ,  杨洋 ,  罗卉 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  李懿莎 ,  曹航 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  肖献忠

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/561

CPC classification number: G01N33/68 ,  G01N33/561 ,  G01N2800/24 ,  G01N2800/7095

Abstract: 本发明公开了抗合成酶综合征EJ自身抗体的检测方法与应用，用于检测抗合成酶综合征患者的EJ自身抗体；其中，非放射标记免疫沉淀法包括：用Protein G磁珠分别与EJ抗体阳性的抗合成酶综合征患者血清或健康对照血清进行结合，然后与过表达EJ的HEK293细胞裂解液孵育进行抗原吸附，洗脱后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用Flag抗体进行检测；免疫印迹法用EJ抗体阳性血清作为一抗，兔抗人IgG H&L作为二抗进行检测；解决国内没有商业化的检测EJ抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条不能测定滴度等问题，以及自行包被EJ抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法安全性问题。

公开(公告)号：CN107144692A

公开(公告)日：2017-09-08

申请号：CN201710279994.9

申请日：2017-04-26

Applicant: 中南大学

Inventor： 张华莉 ,  杨洋 ,  黄莉 ,  王莉 ,  罗卉 ,  左晓霞 ,  朱红林 ,  刘瑛 ,  王国春 ,  李懿莎 ,  曹航 ,  刘可 ,  刘梅冬 ,  陈广文 ,  肖献忠

IPC: G01N33/558 ,  G01N33/535

CPC classification number: G01N33/558 ,  G01N33/535

Abstract: 本发明公开了肌炎特异性自身抗体NXP2抗体的免疫印迹检测方法与应用，构建含NXP2 N端(1‑500aa)或NXP2 C端(400‑939aa)带有Myc标签的质粒pCMV‑myc‑NXP2N或pCMV‑myc‑NXP2C，用待测肌炎患者的血清作为一抗、兔抗人IgG H&L作为二抗确定肌炎患者血清中是否具有NXP2自身抗体；解决了目前国内还没有商业化的检测NXP2抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条的问题，以及自行包被NXP2抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法的安全性等问题。